黑曲霉、绿色木霉的诱变选育及其在秸秆腐熟剂中的应用初探

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中国是农业大国,秸秆作为一种重要的农业副产品,每年有数亿吨产生。由于对秸秆的有效利用率低,秸秆被任意焚烧的情况非常严重,不仅浪费了珍贵的可再生资源,更带来了火灾、大气污染等问题。利用微生物的作用,可以变废为宝,防止对秸秆的浪费及其带来的各种问题,有助于解决大气污染及能源问题。本论文主要工作包括:1)从野外取样以及从实验室保存的菌株中获取纤维素酶和木聚糖酶酶活较高的菌株;2)对筛选所得菌依次进行离子束诱变和钴60诱变,获得相关酶活进一步提高的突变株,并研究突变株的遗传稳定性;3)对突变株所产酶的酶学性质进行研究;4)在实验室条件下,以获得的突变株为主体,研制成腐熟菌剂,并进行腐熟试验,研究其对水稻秸秆的腐解能力。主要研究结果如下。1.从野外分到一株黑曲霉菌株H13,其在产酶培养基中培养68h,木聚糖酶达到最高,为14000U/g;从实验室保存的菌株中获得一株绿色木霉M100726,其在产酶培养基中培养48h,羧甲基纤维素酶(CMCase)酶活达到最高,约为400U/g;2.对H13依次进行离子束诱变与钴60诱变,最终得到遗传稳定的木聚糖酶高产菌株N65-7,其木聚糖酶活最高达到25700U/g;对M100726依次进行离子束诱变与钴60诱变,最终得到遗传稳定的CMCase高产菌株R16-1,其CMCase最高达到587U/g;3.黑曲霉菌株N65-7的木聚糖酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH为5.4,在4℃-40℃时酶热稳定性较好,50℃以上处理15min酶活有损失,pH5.4-pH10之间酶稳定性较好,Mg2+、Ca2+、吐温80、Cu2+对酶有促进作用,Co2+、Mn2+有较大抑制作用。绿色木霉菌株R16-1的CMCase的最适作用温度为50℃,最适作用pH为4.8,在4℃-40℃时酶热稳定性较好,50℃以上处理15min酶活有损失,pH3-pH11之间酶稳定性较好,Cu2+对CMCase酶有明显的促进作用,Co2+有较大抑制作用;4.稻草腐熟试验中,与空白对照相比,实验组的外观、细菌总数、霉菌总数、有机碳含量、碳氮比、秸秆断裂拉力、秸秆残留率均有显著差异。在以R16-1与N65-7为主体制成的秸秆腐熟剂作用下,实验组秸秆约在35d左右达到完全腐熟,此时试验用的秸秆已呈破碎状、深褐色,生存的优势微生物为木霉以及黑曲霉,秸秆中的有机碳含量已降至34%,碳氮比为19.50,试验45d时,实验组秸秆断裂拉力约为试验前的3.3%,秸秆残留35.03%,以上均表明以R16-1与N65-7为主体制成的秸秆腐熟剂有较好的腐熟效果。
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