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目的：细胞衰老是个复杂而渐进的过程，可以分为两类，一类为复制性衰老，即有基本的代谢能力，但没有分化能力；另一类为早老，即永久的、不可逆转的增殖停滞。A型核纤层蛋白前体(prelamin A)的加工异常，导致早老症(HGPS)的出现，推测prelaminA及其结合蛋白可能在细胞衰老过程中起着重要作用。人血管内皮生长因子B(VEGF-B)是一种近年来发现的血管内皮生长因子家族的新成员，为本课题组前期通过酵母双杂交筛选出的与prelaminA相互作用的蛋白之一，其结构与VEGF较为相似，并选择性与VEGF的受体之一VEGFR-1结合。VEGF-B参与血管生成，神经细胞的保护，胚胎发育等生理过程以及一些退行性疾病的病理过程。本课题组前期已通过荧光共定位和GST pull-down等实验，初步证明了VEGF-B是prelamin A的一个相互作用的蛋白。本研究进一步通过提取细胞核、细胞浆蛋白，确定VEGF-B蛋白在HEK-293细胞中的表达定位；通过免疫共沉淀技术证明VEGF-B与prelamin A在细胞内的相互作用；采用RNAi技术初步探讨VEGF-B在细胞衰老中的作用。
方法：构建真核表达载体pDsRed1-N1-PLA质粒，将该质粒转染人胚肾细胞293细胞(HEK-293)，通过Western blotting检测VEGF-B在HEK-293PLA细胞中的表达定位；构建真核表达载体pCMV-MYC-PLA，将pCMV-MYC-PLA和pCMV-HA-VEGF-B质粒共转染HEK-293细胞，进行免疫共沉淀。采用QRT-PCR技术检测VEGF-B在HEK-293和HEK-293PLA细胞中mRNA的表达情况；通过RNAi技术观察VEGF-B蛋白在HKE-293细胞中对衰老细胞的影响。
结果：成功构建真核表达载体pDsRed1-N1-PLA质粒，Western blotting显示VEGF-B在HEK-293PLA细胞中表达定位在细胞核；通过免疫共沉淀技术，证明了VEGF-B和prelamin A在HEK-293细胞内有相互作用；QRT-PCR结果显示：与HEK-293细胞相比，VEGF-B在HEK-293PLA细胞中mRNA的水平表达下降；RNAi技术沉默VEGF-B后HKE-293细胞呈现出衰老表型。
结论：VEGF-B和prelamin A在细胞内有相互作用，两者能共定位于细胞核。在衰老表型细胞HEK-293PLA中VEGF-B表达下调，该蛋白的表达对细胞的衰老产生影响。