本研究论文主要包括以下两个方面:（一）Palladin在全反式维甲酸（ATRA）诱导急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞分化过程中的功能研究;（二）Palladin参与吞噬的具体环节和机制研究。第一部分 Palladin在ATRA诱导APL细胞分化过程中的功能研究急性早幼粒细胞白血病（APL）是一种相对少见的急性白血病,但它却是目前为数不多的能够通过靶向治疗治愈的疾病。临床上APL发病非常凶险,特别是诱导治疗时易出现致病性的出凝血异常。全反式维甲酸（ATRA）和砷剂的联合运用大大提高了APL的治疗疗效,是APL治疗方面里程碑的事件1。临床试验表明联合ATRA和砷剂治疗初发APL的5年总生存率可以达到约90%2。Palladin基因,也称为RIG-K（Retinoid acid inducible gene-K）,在ATRA诱导的APL细胞株分化过程中表达上调。我们实验室是最早发现Palladin基因的三个工作组之一,我们对Palladin的研究主要是在急性早幼粒细胞白血病细胞分化的背景下,研究其功能以及相应的分子机制。前期的工作基础发现Palladin在NB4细胞分化过程中表达上调。本文第一部分主要是对诱导分化过程中Palladin的功能进行初步的筛查。结果发现:1.根据形态学和流式细胞仪实验结果,Palladin的敲减对NB4分化过程中的细胞形态学改变和细胞分化标记CD11b的表达水平影响不大;2、在细胞增殖和细胞凋亡方面,Palladin敲减可以部分解除ATRA引起的NB4细胞增殖抑制,同时降低NB4分化晚期发生凋亡的比例;3、Palladin是一个微丝骨架相关蛋白,分化成熟的NB4细胞中Palladin参与组成伪足小体、片状伪足等结构,Palladin的敲减会使得这些结构减少,抑制分化NB4细胞的粘附、迁移、铺展、吞噬等成熟粒细胞相关功能;5、分化的NB4细胞亦可分泌很多趋化因子,实时定量PCR和趋化因子抗体芯片的结果都显示,Palladin敲减后CCL22、IL-8、CCL3、CCL4和CCL20等趋化因子表达水平较对照组明显降低,提示Palladin可能参与了相关基因的转录调控;3.体外模型显示Palladin的敲减可以明显减少分化的APL细胞向小鼠肺组织的趋化运动以及对肺组织侵袭的能力,提示Palladin的诱导表达可能在维甲酸综合症的发生中起到一定的作用。第二部分 Palladin基因参与吞噬的机制研究第一部分的工作表明,Palladin作为一个微丝骨架相关蛋白,不影响分化的进程,但是却参与很多成熟粒细胞相关功能如细胞迁移、粘附、趋化和吞噬等,在此基础上,这部分着重研究Palladin基因参与吞噬的具体环节和分子机制。研究发现:1.Palladin基因在不同受体介导的吞噬过程中作用不一,Palladin在Fc受体和补体受体介导的吞噬中有重要作用,而在清道夫受体介导的吞噬中作用不明显;2.Palladin影响吞噬的环节包括吞噬早期的粘附过程,以及吞噬早期的吞噬杯形成和内化的过程,对吞噬体成熟过程中吞噬体与内体、溶酶体的融合过程没有明显的影响;3.Palladin影响吞噬早期受体活化的过程,如FcγRIIA的聚集,该过程可能与Palladin对微丝骨架组装的调控以及Palladin与c-SRC的相互作用有关;4.发现Palladin的一个新的相互作用蛋白OCRL,Palladin与OCRL在吞噬体上存在共定位,Palladin敲低会影响OCRL在吞噬体上的募集,而OCRL是参与吞噬过程中磷脂酰肌醇代谢的一个5’-磷酸酶,通过对磷脂酰肌醇代谢的调节参与F-actin的解聚,从而在吞噬体的内化过程中发挥作用,提示Palladin在吞噬体闭合环节通过募集OCRL促进磷脂酰肌醇的代谢,调控微丝的解聚,从而有利于吞噬杯的闭合过程。