抗WSSV囊膜蛋白单抗的中和效果研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenfei87827
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本论文利用抗WSSV蛋白VP28、VP26、VP19的单克隆抗体杂交瘤细胞生产腹水并进行了提纯;利用酶联免疫吸附法(ELISA)和克氏原螯虾(Cambarus proclarkii)检测了单抗在不同病毒浓度下以及单抗两两混合的中和效果,结果表明MAb1D6(VP28)随病毒浓度的降低,体内中和效果越明显;同时提取了VP28、VP26、VP19三种蛋白并通过双向电泳对囊膜蛋白VP28进行初步分析。具体研究结果如下:(1)WSSV的提纯及抗WSSV囊膜蛋白单克隆抗体的生产:使用差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯WSSV。复苏了本实验室制备的1D6、2G3、3G7、2E9等4株单克隆抗体杂交瘤细胞,通过生产腹水得到了足量的抗体并对其进行提纯。经间接免疫荧光检测,四株抗体与感染WSSV的虾鳃均呈特异性反应。经Western-Blot检测,1D6、2G3能与WSSV蛋白VP28反应,3G7能与WSSV蛋白VP26反应,2E9能与WSSV蛋白VP19反应。(2)不同病毒浓度下WSSV单抗的体内中和实验:通过酶联免疫吸附法测定不同稀释度的WSSV与已制备的WSSV囊膜蛋白单克隆抗体1D6及2E9结合的OD值。结果显示,在1×10-3病毒稀释度下两种单抗均足量。利用克氏原螯虾动物模型,将不同稀释度病毒与单抗1:1混合孵育2h后,肌肉注射克氏原螯虾(50μL/只),观察记录螯虾的死亡情况。结果显示当病毒浓度为1×10-3、1×10-4、1×10-5、1×10-6稀释度时, MAb1D6(VP28)螯虾组最终死亡率分别为100%、90%、16.7%、6.7%,而MAb2E9(VP19)螯虾组最终死亡率分别为100%、100%、100%、93.3%。这表明随病毒浓度的降低,MAb1D6(VP28)的中和效果越明显。而MAb2E9(VP19)并无明显的中和效果。在螯虾中和实验中,除阴性对照组、MAb1D6(VP28)的1×10-5、1×10-6病毒稀释度组之外,死亡螯虾经间接免疫荧光检测均呈WSSV感染阳性。(3)WSSV混合单抗的中和实验:提取中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)血细胞膜并对WSSV进行地高辛标记,将单抗两两混合后与病毒作用,吸附对虾血细胞膜,使用抗地高辛抗体检测结合到血细胞膜上的病毒。结果显示混合前后OD值无明显变化,因此不能证明四株单抗之间具有协同作用。利用克氏原螯虾动物模型,将MAb1D6(VP28)与另外三株抗体分别混合,将混合液与WSSV粗提液1:1混合孵育2h后,肌肉注射克氏原螯虾(50μL/只),观察记录螯虾的死亡情况。结果显示单抗混合之后螯虾的累积死亡率与MAb1D6(VP28)螯虾组的累积死亡率无显著差异,因此不能证明MAb1D6(VP28)与其他三株抗体之间具有协同作用。(4)WSSV囊膜蛋白VP28的初步分析:通过对病毒进行SDS-PAGE,切胶分离病毒蛋白,并洗脱提纯,获得了VP28,VP 26及VP19三种蛋白。经Western-blot检测,所提取的VP28蛋白与MAb1D6以及MAb2G3均呈阳性反应。将VP28进行双向电泳,图谱显示,Blue Silver染色法染色之后的胶体,只有一个蛋白点可见,其等电点在5.8左右,因此VP28蛋白可能由单一的蛋白构成。
其他文献
讨论将计算机仿真优化技术应用于敏捷虚拟企业组织建立的有关问题。介绍敏捷虚拟企业组织建立过程,提出支持敏捷虚拟企业组织建立的计算机仿真优化问题及其关键技术。结合支持
优秀的校园文化不仅是一种氛围,更是一所学校的灵魂,是学校内涵式发展的驱动力,它既可以淘治学生的情操、启迪学生心智,又能促进学生的全面发展。
本文介绍了以磁阻效应为工作原理的InSb精密角位移传感器的设计和制作。这种传感器的主要特点是高分辨率、非接触、体积小、重量轻和使用寿命长。性能测试结果表明,在±12°范围内,其
本文通过对电液伺服试验机系统建模和分析,指出试验机中负载刚度变化对系统的影响,并进一步分析了对位置控制系统和负荷控制系统的影响程度,引入自适应模型跟随(AMFC)控制策略,仿真和实
智能制造被誉为21世纪的制造技术。智能制造技术(IMT)和智能制造系统(IMS)近年来发展较快,是由于市场竞争的冲击和信息革命的推动。市场竞争的现实表明,社会需求正从大批量
本文研究了含有范数有界参数不确定的性连续系统在未建模外部于扰信号作用时的鲁棒最小方差滤波问题.给出了最坏情形H2性能指标在满足一个H∞估计误差约束时的一个上界,并设计
该文主要以2002年辽东湾北部海区的生态监测数据为基础,结合2001和2003年的部分数据,对辽东湾北部的浮游植物进行了研究.为了更好地分析和讨论,将辽东湾北部海区人为划分为三
棘头梅童鱼是暖温低盐性、近岸底栖性的小型经济鱼类。其分布广泛,主要分布于中西太平洋区的南海、东海和黄渤海。因其肉鲜嫩、味美,生长迅速,分布范围广,是沿海地区主要鲜食
近年来,传媒与司法的紧张关系随着依法治国的展开以及二者各自在实践中的不断深入和发展而逐渐凸显出来,对两者关系的正确把握有助于缓解甚至消除目前传媒与司法之间的尴尬局
本文主要分为两部分,第一部分是对半滑舌鳎胚胎发育的研究,第二部分是对半滑舌鳎幼鱼营养需求的研究。1.半滑舌鳎胚胎发育的研究1.1温度对半滑舌鳎胚胎发育的影响温度组试验