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获得高质量的体外成熟卵母细胞是体外受精、体细胞克隆和转基因动物制备等胚胎工程技术的首要环节,但相比体内成熟的卵母细胞,体外成熟的卵母细胞成熟率、成熟质量和发育潜能存在明显差异,因此完善卵母细胞体外成熟体系是目前胚胎工程技术亟待解决的关键问题。本研究系统分析了培养液中添加卵泡液、蛋白、糖类、蛋白因子和激素等对猪卵母细胞体外成熟的影响,结果如下:（1）探究了外源蛋白质及其类似物对卵母细胞成熟及对后续胚胎发育的相关影响,选择M199作为培养基液,在其中添加10%FBS、0.1%PVA以及4 mg/m L BSA作为外源蛋白质及其类似物,并选择不添加蛋白质及其类似物作为对照组。实验结果显示,在经过添加10%FBS的成熟液后的卵母细胞其成熟率高于对照组,但显著低于添加了0.1%PVA以及4 mg/m L BSA的成熟培养液（p＜0.05）,在卵裂率方面,添加了10%FBS组卵裂率高于0.1%PVA组与对照组,但与4 mg/m L BSA组差异不显著（p＞0.05）,而囊胚率方面,添加了10%FBS组显著高于其余三组,4 mg/m L BSA组显著低于0.1%PVA组（p＜0.05）,但均显著高于对照组（p＜0.05）（2）探究了不同卵泡液对于猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育效果的影响。结果显示,在成熟培养液中是否添加有无黄体的卵泡液,成熟率并无显著影响（p＜0.05）,但添加有黄体的卵泡液其单个卵丘卵母复合体（Cumulus-Oocyte Complexes,COCs）扩展程度显著高于添加无黄体的卵泡液（p＜0.05）。（3）在成熟培养液中以LH与FSH作为激素添加,以LH为变量,发现在培养液中添加0.02 IU/m L LH,成熟率显著高于其余三组（p＜0.05）,LH浓度于卵丘细胞扩展程度正相关,单个COCs扩展进一步被提高。（4）卵母细胞在进行电激活之后,其卵裂率及囊胚率均显著高于单独化学组以及电激活联合化学激活组（p＜0.05）,且进行电激活和化学激活联合使用后,卵裂率和囊胚率均显著低于其它两组（p＜0.05）。（5）探究了葡萄糖对孤雌胚胎发育的影响。结果显示,卵裂率方面,添加3.05 m M葡萄糖组,不添加葡萄糖组组间无明显差异,二者显著高于11.00 m M葡萄糖组以及4.00 m M葡萄糖组（p＜0.05）,而4.00 m M葡萄糖组显著低于11.00 m M葡萄糖组（p＜0.05）。囊胚率方面,不添加葡萄糖组其囊胚率显著高于其余组,不添加葡萄糖组低于添加5.55 m M葡萄糖组,但显著高于其余三组（p＜0.05）,添加4.00 m M葡萄糖组高于3.05 m M葡萄糖组与11.00 m M葡萄糖组,而3.05 m M葡萄糖组与11.00 m M葡萄糖组间无显著性差异。桑葚胚率方面,3.05 m M葡萄糖组显著高于其余四组（p＜0.05）,4.0 m M葡萄糖组显著高于5.55 m M葡萄糖组、11.00 m M葡萄糖组,而不添加葡糖组则显著低于其余四组（p＜0.05）,由此可知在不同胚胎发育阶段,体外培养胚胎对于葡萄糖有着不同的需求。（6）探究了不同浓度雌二醇（β-Estradiol,E2）和白血病抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor,LIF）协同对猪卵母细胞成熟及胚胎发育的关系。结果显示,在成熟率方面,添加LIF的组成熟率方面均无显著性差异（p＜0.05）,但添加0.27μg/m L的E2,成熟率显著低于添加1μg/m L E2（p＜0.05）,而对单个卵母细胞的COCs扩展程度方面,添加LIF+0.05μg/m L E2则显著高于其余组（p＜0.05）,而添加LIF+1μg/m L E2组则显著低于其余组（p＜0.05）,单独添加E2及LIF的ROS程度显著高于其余组（p＜0.05）,而添加LIF+E2组之间ROS程度无显著性差别（p＜0.05）,结果显示LIF和E2的共同添加能够减少成熟卵母细胞间的ROS水平。（7）探究了在胚胎培养液中添加不同浓度葡萄糖下,E2和LIF对胚胎发育的协同作用。根据结果展示,在0 m M葡萄糖组中,卵裂率、囊胚率以及囊胚细胞数目,E2和LIF对胚胎发育的促进作用均显著高于其余组（p＜0.05）,但在5.55 m M组中,E2和LIF对于胚胎发育的促进作用高于3.05 m M和11.00 m M,而3.05 m M组与11.00 m M组囊胚率及囊胚细胞数目均显著低于其余组（p＜0.05）;在囊胚细胞凋亡数目方面,0m M均显著低于其余组,表明E2和LIF的协同作用在0 m M葡萄糖的添加中最为显著（p＜0.05）。上述结果表明,确定体外培养猪卵母细胞成熟液采用添加20 ng/m L LIF,20 ng/m L IGF-1,40 ng/m L FGF-2的成熟培养液,能够实现对培养液的优化,同时在胚胎激活方式中,选择电激活方式1.2 k V/cm,60μs,电脉冲2次,并采用不含葡萄糖的培养液培养胚胎能获得最多囊胚,在成熟培养液中添加添加20 ng/m L LIF,20 ng/m L IGF-1,40ng/m L FGF-2以及1μg/m L的E2,能显著减少成熟卵母细胞ROS水平,并降低囊胚细胞凋亡数,提高囊胚发育率。