基于SSR分子标记的火龙果遗传多样性研究

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本次实验利用SSR分子标记对来源于广西南宁、广西桂林、广西巴马、广东从化、海南琼海的96份火龙果种质资源进行遗传多样性研究,并以4%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物;同时对96份火龙果种质资源进行表型性状观察记录,期望依靠分子技术的优点对部分火龙果种质资源进行准确有效的鉴定,打击掺假的现象,同时对保护火龙果种质资源具有重要意义以及为优良火龙果新品种的选育提供数据信息。本次实验结果如下:(1)火龙果样品DNA的提取,因多糖含量高,质量不稳定。通过查阅火龙果相关文献,改进CTAB法,在提取步骤第五步加入了与异丙醇同等体积的10%kAc,第七步到第十二步增加吸附柱物理过滤,提取得到的DNA样品在浓度及纯度上质量好,能够满足下一步的实验要求。(2)火龙果SSR实验体系。为保证实验结果理想,本次实验事先对SSR-PCR反应体系、SSR-PCR扩增程序、琼脂糖凝胶电泳体系进行了优化,实验体系优化得到的结果满足本次实验的要求。(3)SSR核心引物的筛选。采用优化后的SSR实验体系从100对SSR引物中筛选出20对重复性好、带型清晰可辨且多态性好的SSR核心引物。(4)利用20对火龙果SSR核心引物对96份火龙果种质资源进行多样性研究,共计得到清晰可辨认的条带109条,经PCR扩增后得到的DNA片段大小大约在100-350bp之间,每对火龙果SSR核心引物能够扩增出3-8条具有多样性条带,平均每对火龙果SSR核心引物能够扩增出约5条具有多样性特征及清晰可辨的条带,当以Jaccard系数0.700为标准时,这96份火龙果资源可以大致分为6大类。说明SSR分子标记适用于火龙果品种鉴别。
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