【摘 要】
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食源性致病菌是指以食品为传播媒介可侵犯人体引起感染甚至传染病的病原微生物,它所引起的食品安全问题和感染性疾病等一系列问题一直是威胁人类健康的巨大隐患。常见的致病
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食源性致病菌是指以食品为传播媒介可侵犯人体引起感染甚至传染病的病原微生物,它所引起的食品安全问题和感染性疾病等一系列问题一直是威胁人类健康的巨大隐患。常见的致病菌如大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)极易引发细菌性食物中毒,严重者甚至会危及人类生命。因此针对于食源性致病菌的快速高效检测方法的研发对食品安全风险防控和人类细菌传染性疾病的预防具有重要意义。然而传统的微生物检测方法耗时费力,快速检测方法如聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)等存在着操作复杂、仪器材料昂贵、假阳性高等局限性。因此,发展一种简单、快速、灵敏、高选择性的检测手段对致病菌进行监控具有十分重要的现实意义。本文基于量子点(quantum dots,QDs)和纳米金(gold nanoparticles,AuNPs)优良的光学性质,建立了基于核酸适配体(Aptamer)的特异性识别及凝集素或抗生素的广谱识别的双分子识别的荧光共振能量转移(Forster resonance energy transfer,FRET)传感器用于检测食源性大肠杆菌和细胞内金黄色葡萄球菌,主要内容如下:工作一:本工作主要利用廉价易得的生物分子凝集素刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)作为稳定剂,NaBH4为还原剂,一锅法还原HAuCl4得到刀豆蛋白A修饰的金纳米颗粒(Con A-AuPNs)。该合成方法简单、快速(约40 min),合成产物Con A-AuPNs均匀分散,在518nm处有特征吸收,有较高的吸光系数。将E.coli作为待检致病菌模型,基于凝集素和适配体的双重识别,以特异性适配体修饰的量子点(Aptamer-QDs)作为能量供体(发射波长在525nm)、Con A-AuPNs为FRET能量受体,构建了FRET传感器在0.5 h内实现了对E.coli的定量检测。其线性范围为1022×108 cfu/mL,检测限为45 cfu/mL。将该策略用于检测真实样品牛奶和橙汁中的E.coli时,回收率为83.1%112.5%,相对标准偏差为0.050.50%,具有潜在的实用价值。本工作建立的简便、快速、特异性的致病菌检测通用方法对于食品安全的有效监控具有重要意义。工作二:本工作以S.aureus特异性适配体修饰的量子点(Aptamer-QDs)和一锅法合成的抗生素替考拉宁(Teicoplanin,Teico)修饰的金纳米颗粒(Teico-AuNPs)分别作为能量转移的供体和受体构建FRET传感器检测S.aureus。构建细胞(RAW 264.7)内S.aureus侵染模型,通过共聚焦显微镜和平板涂布的方式证明了S.aureus在RAW 264.7细胞内存活。该FRET传感器能在2 h内有效检测RAW 264.7细胞内S.aureus,且对于不同程度的S.aureus侵染的RAW 264.7细胞有明显的荧光信号区分,在判断细胞细菌感染程度上有一定的潜在应用价值。本工作建立了简便、特异、省时且适用于大量样品分析的细胞内S.aureus检测方法,对食源性动物细菌感染性疾病的诊断和指导治疗有着潜在意义。
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