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目的：通过SP细胞分选法分离大肠癌干细胞并验证其干细胞特性；观察片仔癀对大肠癌干细胞生长的影响,并探讨其作用机制,为临床抗大肠癌应用提供实验依据。方法：1.大肠癌干细胞的分离及鉴定：运用SP细胞分选法从大肠癌细胞株SW480中分选出大肠癌干细胞；采用单细胞克隆球形成实验检测大肠癌干细胞的体外成球能力；通过BALB/c裸鼠移植瘤实验检测大肠癌干细胞的体内致瘤能力。2.片仔癀对大肠癌干细胞生长的影响及作用机制：运用倒置显微镜观察片仔癀对大肠癌干细胞形态的影响；采用MTS实验检测片仔癀对大肠癌干细胞活力的影响；采用克隆球形成实验检测片仔癀对大肠癌干细胞体外成球能力的影响；通过BALB/c裸鼠移植瘤实验检测片仔癀对大肠癌干细胞体内致瘤能力的影响；运用Q-PCR、Western blot等实验方法研究片仔癀对大肠癌干细胞Wnt/β-catenin信号通路关键基因β-catenin, Lgr-5 mRNA和蛋白表达的影响；运用免疫荧光技术检测片仔癀对大肠癌干细胞P-catenin蛋白核内转位的影响。结果：1.大肠癌干细胞的分离及鉴定：(1)SP细胞分选法分选大肠癌干细胞的比例为0.84%±0.02%(**P<0.01)；(2)体外单细胞克隆球形成实验结果显示：SP细胞分选法取得的大肠癌干细胞具有更强的成球能力；(3)体内BALB/c裸鼠移植瘤实验结果表明SP细胞分选法取得的大肠癌干细胞具有更强的成瘤能力。2.片仔癀对大肠癌干细胞生长的影响及作用机制：(1)倒置显微镜观察发现：片仔癀干预后,大肠癌干细胞密度减少、形成的球体减小；(2)MTS检测结果表明：片仔癀具有显著抑制大肠癌干细胞活力的作用(*P<0.05)；(3)克隆球形成实验结果表明,片仔癀可显著抑制大肠癌干细胞的体外成球能力(*P<0.05)；(4)体内BALB/c裸鼠移植瘤实验结果表明：经片仔癀0.5 mg/mL干预后的大肠癌干细胞体内成瘤能力明显减弱,且瘤体生长缓慢；(5) Q-PCR和Western blot实验结果发现,片仔癀可显著抑制Wnt/β-catenin信号通路的关键基因P-catenin及下游靶基因Lgr-5 mRNA及蛋白的表达(*P<0.05)；(6)免疫荧光实验结果显示：片仔癀可抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin蛋白的核易位。结论：大肠癌细胞株SW480中含有SP细胞,且SP细胞具有较强的体外成球及体内成瘤能力,可作为大肠癌干细胞分选富集的方式；片仔癀可抑制大肠癌干细胞的活力、体外成球能力及体内致瘤能力,且抑制Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin的活化及下游靶基因Lgr-5的表达可能是其重要的作用机制。