表面等离子体共振生物传感器三维芯片表面构建及应用

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本论文以提高SPR传感器的灵敏度及拓展SPR技术的应用范围为目的,开发了两种新型的SPR芯片用三维基质,并引入微接触印刷手段构建SPR芯片表面三维结构。   首先,通过表面引发原子转移自由基聚合在金膜表面生长了聚乙二醇刷状高分子薄膜。通过SPR传感器检测该表面同条件下固定蛋白量是裸金表面的2.65倍;该表面固定HIV整合酶可检测到分子量低至300Da的小分子与其的相互作用;基于该表面可检测多肽间相互作用且能检测到最高KD值为1.91×10-4M。通过在该表面共价固定链霉亲和素成功用于检测生物素标记多肽-多肽间的相互作用。通过在该表面共价固定光交联剂,成功用于检测小分子阵列-疾病相关蛋白间的相互作用,为高通量药物筛选提供了一种新的平台。   其次,开发了新型的环糊精基聚轮烷三维刷状表面,成功用于检测低分子量物质包括多肽-多肽及多肽-小分子间的相互作用。成功检测到多肽Aβ40等与多肽抑制剂KLVF2K6及LPFFD之间的弱相互作用,并且检测了20种氨基酸的八聚体与小分子四磺酸酞菁铜钠、刚果红和硫磺素体之间的相互作用,为一些多肽和药物分子的设计提供了理论上的帮助。   最后,引入微接触印刷手段,通过静电吸附作用将聚丙烯酸电解质图案化制备在巯基乙胺修饰的金膜表面。通过模式蛋白免疫检测证实该表面可用于荧光和SPR技术;乙肝病毒表面抗原浓度阵列芯片免疫检测,进一步证实该表面可进行蛋白-蛋白相互作用的高通量筛选。
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