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背景:静脉血栓塞症(venous thromboembolism,VTE),是一种常见病、多发病。在临床研究中,将其形成因素分为获得性和遗传性。遗传性因素中,凝血酶激活的纤溶抑制物(thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)正日益受到人们的关注。研究发现,TAFI作为凝血和纤溶系统二者之间平衡的因子,可能在许多血栓疾病中起到一定的作用。TAFI及其编码基因的多态性可能成为预测血栓事件的标志物,其中,TAFI 505A>G和1040C>T是公认的重要位点。
目的:建立简单、快速、精确、重复性高的检测方法,检测TAFI 505A>G和1040C>T单核苷酸多态性,探讨中国汉族人口中VTE易感性与各基因型之间以及年龄、性别、是否吸烟等临床因素的关系。
方法:通过设计合适的ARMS-PCR引物,对反应条件进行优化,确定了最佳的模板浓度和退火温度,建立了对TAFI 505A>G和1040C>T的ARMS-PCR检测方法。并应用直接测序验证了该方法的准确性,同时验证了方法的重复性。应用该方法对VTE患者和对照组TAFI 505A>G和1040C>T进行基因分型。
结果:TAFI 505A>G位点,317例对照组中:从型21例(6.62％),AG型116例(36.59％),GG型180例(56.78％)；A和G等位基因频率分别为24.9％和75.1％。TAFI 1040C>T位点,509例对照组中:CC型370例(72.69％),CT型126例(24.75％),TT型13例(2.55％)；C和T的基因频率分别为85.1和14.9％。经Hardy-Weinberg平衡检验,P值大于0.05,说明所研究的病例样本具有群体代表性。TAFI 505A>G位点,349例病例组中:从型10例(5.73％),AG型160例(45.85％),GG型169例(48.82％),A和G等位基因频率分别为28.65％和71.35％。TAFI 1040C>T位点,CC型324例(67.92％),CT型142例(29.77％),TT型11例(2.31％),C和T等位基因频率分别为82.21％和17.79％。在调整了性别、年龄和吸烟因素后,统计分析结果显示TAFI 505AG基因型与VTE发病风险有关,其OR值=1.45,95％置信区间为(1.05,1.99),P=0.0244,但TAFI 505AA基因型与VTE发病风险无关；显性模型logistic回归分析结果表明,携带TAFI 505AG和TAFI 505AA基因型的个体患VTE的风险是携带野生纯合基因型TAFI 505GG个体的1.38倍,置信区间为(1.01,1.88),P=0.0421。TAFI 1040C>T各基因型及显性模型分析在VTE组和正常对照组间差异无统计学意义,P>0.05。
结论:本研究显示,对年龄、性别、是否吸烟进行校正后,TAFI 505A>G位点的基因多态性与VTE发病有关,携带杂合子基因型TAFI 505AG的个体VTE的发病风险增加,推测TAFI 505A>G的等位基因A可能与VTE的发病有关。而TAFI1040C>T基因多态性与VTE发病无关。