草莓膜联蛋白基因启动子的克隆及功能分析

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草莓(Fragaria ananassa Duch.)属典型的非跃变型果实,其成熟期短,不易贮藏,严重影响了其经济价值,因此对草莓果实成熟调控进行研究具有重要意义。草莓膜联蛋白(Annexins)基因可能在果实成熟过程中发挥作用,该基因的表达和果实成熟的关系尚需进一步研究,为此本实验克隆了膜联蛋白基因的启动子并进行功能分析,为研究草莓果实成熟机理打下了基础。应用PCR技术从草莓叶片中分离并克隆了草莓膜联蛋白基因(annfaf)的启动子序列,长度为2.6kb。用PLACE在线启动子预测软件分析了其可能存在的元件。结果表明:该序列含有启动子顺式作用元件的特定结构,如TATA-box、CAAT-box等,另外含有一些与ABA、光调控等有关的调控序列,说明草莓膜联蛋白基因的表达可能与草莓果实的成熟有关,为进一步研究该序列对草莓膜联蛋白基因的表达调控规律提供生物信息学参考。为研究草莓annfaf基因启动子的结构功能,构建不同缺失序列的7个启动子5’端缺失片段,采用农杆菌介导法对草莓叶片及果实进行基因转化,借助瞬时表达及稳定表达检测研究各序列在annfaf基因表达中的功能,建立了草莓annfaf基因启动子5’端缺失片段无性系及其实验体系。结果表明:草莓annfaf基因启动子具有组织特异性,说明其调控表达与果实成熟具有相关性;annfaf启动子各序列能驱动GUS基因表达,具有启动子活性;GUS基因酶活性检测表明该启动子的核心调控序列在转录起始点上游-32bp处;-2210bp~-1714bp序列中存在抑制序列;-1453bp~-1148bp中有增强序列。
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