沙门氏菌（Salmonella）是一种肠道致病菌,是引起食物中毒的最主要病原菌之一。沙门氏菌可通过来自畜禽及其粪便、蛋类和污染的水源等方式传播,继而感染人和动物,严重威胁人和动物的健康。沙门氏菌的泳动在细菌黏附和侵袭宿主细胞中发挥着重要作用,探究沙门氏菌泳动机制对沙门氏菌的防控具有重要理论意义。已有报道表明沙门氏菌的泳动主要由鞭毛介导,其合成和组装由三个层级的精密调控系统控制,但鞭毛蛋白的表达调控和作用机制仍有待完善。在本研究中,本实验室和合作者共同分离鉴定到一株泳动性天然缺陷的沙门氏菌Salmonella enterica A60菌株。与其同属近缘菌株Salmonella enterica NCTC10384菌株相对比,A60菌株生长较慢,且对Caco-2细胞黏附能力很弱;电镜结果表明A60菌株无鞭毛;胞外蛋白SDS-PAGE检测显示鞭毛结构蛋白Fli C等表达和分泌缺陷;实时荧光定量PCR检测A60菌株鞭毛基因发现一级和二级鞭毛基因转录正常,但三级调控因子Fli A及其靶基因转录水平较低;然而,在A60菌株中过表达Fli A,并不能恢复A60菌株泳动性,提示除Fli A及其靶基因的表达异常外,还存在其它因素导致了A60菌株的泳动性丧失;进一步对A60菌株鞭毛基因进行测序,发现A60菌株与NCTC10384相比,存在Ydi V第123位提前终止和MotB V239M突变;然而,在A60敲除菌株中回补野生型Ydi V和MotB,无法恢复其泳动性,且Ydi V Q123X和MotB V239M突变体不影响NCTC10384菌株的泳动性,提示Ydi V Q123X和MotB V239M不影响沙门氏菌的泳动能力。综上,本研究中分离鉴定到一株泳动性丧失的沙门氏菌株A60,其鞭毛缺失,细胞黏附能力减弱,生长减慢,Fli A及其靶基因转录水平降低是其泳动性丧失的因素之一,但仍有其它导致A60泳动性丧失的因素有待阐明。在MotBV239M功能分析的基础上,进一步采用点突变的策略,分析了MotB的E97、E147、D217、R238、R260和S262在沙门氏菌泳动中的作用。结果表明E97、E147、D217、R238、R260突变为A后,沙门氏菌的泳动能力不受影响;S262突变为A后,其泳动能力显著降低。进一步研究表明MotB的S262突变成T、D、E和W后,其泳动能力和野生型菌株相当;突变成C、K、F、Y和L后,其泳动能力完全丧失;突变成N后表现出极弱的泳动能力。MotB的质谱鉴定表明S262位点处无磷酸化修饰。电镜结果表明泳动缺陷的的MotB S262A等突变菌株的鞭毛形态正常。生长曲线分析表明,泳动缺陷的MotB突变菌株比野生型菌株略慢。MotB质子塞缺失菌株的回补实验表明,S262不是质子结合位点。相关研究为进一步阐明S262位点在沙门氏菌泳动性调节中的作用机制奠定了理论基础,对沙门氏菌的防控具有重要理论意义。