研究背景肺癌在全世界范围内自上世纪末起已成为恶性肿瘤死亡的首要原因,其发病率和死亡率持续上升。在我国,肺癌目前已成为恶性肿瘤死亡的首位原因。肺癌日益危害人类的健康,因此有效的治疗方法成为研究热点。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年发展起来的基因沉默技术,具有高效性、特异性、稳定性等显著特点,较其他基因治疗手段更有优越性。基因治疗需要有效的靶点。兰尼碱受体1(Ryanodine receptors 1,RyR1)是一种同种四聚体钙离子通道蛋白,在钙离子信号的产生及肌细胞兴奋收缩中起关键性的作用。研究报道提示RyR1基因与多种肿瘤细胞的增值凋亡有关。本课题的前期研究已证实肺癌组织RyR1蛋白表达阳性率低于肺良性肿瘤和肺癌旁正常组织。本课题评估RyR1基因沉默对肺癌细胞生物学活性的影响,以期寻找到一个新的肺癌转移相关基因,为肺癌的治疗及预后评估提供新的分子靶点和肿瘤复发转移的标志。研究目的研究下调RyR1 mRNA基因表达对肺癌细胞A549生物学活性的影响。研究方法1.设计并合成针对RyR1基因的siRNA、阴性对照及阳性对照小片段,转染肺癌细胞株A549;2.RT-PCR检测转染前后RyR1 mRNA表达的变化;3.MTT实验检测转染前后细胞增殖能力的变化;4.流式细胞术检测转染前后细胞周期及凋亡的改变。结果1.RyR1-1969 siRNA干扰片段下调RyR1基因mRNA相对表达量与阳性对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。2.RyR1-1969 siRNA干扰片段对RyR1基因沉默率达60.6%。3.细胞生长曲线、细胞周期和细胞集落形成实验显示,RyR1表达沉黙后的A549细胞与对照细胞相比较,其生长减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默RyR1基因mRNA表达可使肺癌细胞的生长速度减慢、凋亡率明显上升,更多的细胞停滞在静止期期,从而抑制肺癌细胞增殖。RyR1可能发挥癌基因的作用,为肺癌的基因治疗提供新靶点。