论文部分内容阅读
癌症是一种严重威胁人类健康的疾病,而化疗在癌症治疗中占有重要的地位。传统的化疗通过全身给药进行治疗,在杀伤癌细胞的同时,也对生物体内正常的细胞和组织产生毒副作用,并且降低了药物的利用率。除此之外,部分癌细胞具有固有或获得性的耐药性,严重降低了药物治疗的效果。随着纳米技术的进步,纳米材料在药物运输方面的应用得到了很大的发展,从而为解决上述问题、提高化疗效果提供了新的思路。纳米载药体系具有独特的EPR效应,能够聚集在癌组织当中,实现针对病灶的靶向给药。另外,通过一系列设计和构造,一些纳米载药体系能够响应癌细胞不同于正常细胞的微环境,将药物释放在癌细胞内部,既减少了对正常组织的伤害,也大大提高了药物的利用率。这些优势使刺激-响应型纳米载药体系受到了广泛关注,近些年来,相关的研究不断增加。本文使用生物相容性良好的聚乳酸乙醇酸(PLGA)包载NaHC03,构建了一种pH响应型的纳米载药体系NP-NaHCO3。该载药体系通过内吞作用进入溶酶体,而溶酶体具有弱酸性的生物环境(pH 5.0),其氢离子能够透过纳米外壳,与NaHCO3反应并释放C02气体,破坏粒子并使当中的药物释放出来。首先探究了制备过程中各参数对粒径的影响,之后通过扫描电镜表征选出能够响应酸性条件产生破损且粒径最小的粒子,用于后续实验。动态光散射及Zeta电位表征显示它的粒径在280 nm左右,外电位呈负值;连续五天的粒径表征显示NP-NaHC03的粒径不发生改变,具有良好的稳定性。之后以阿霉素DOX做为模型药物,检测了它响应弱酸性条件可控释药的能力。体外释放结果表明,当pH为5.0时,DOX的释放速率明显高于pH 7.4环境中的释放速率,说明NP-NaHCO3能够响应酸性环境加速释放药物。用荧光共聚焦显微镜对NP-NaHCO3-DOX和溶酶体做了共定位实验,两者共定位系数0.83,证明粒子进入了溶酶体。最后测定了 NP-NaHC03-DOX在MCF-7和A549-DDP细胞中的毒活性,发现该载药体系毒性高于游离DOX和非pH响应型的对照组NP-DOX,具有良好的抗癌活性。在证明NP-NaHCO3的响应控释能力及作为药物载体的有效性后,我们基于组内之前的工作,将抗癌药物顺铂和锌离子螯合剂TPEN共同负载在纳米粒子中,并探究它在克服顺铂耐药性方面的可能性。顺铂耐药机理之一与胞内谷胱甘肽(GSH)的过表达有关,而根据本组以前的研究,GSH的表达经由锌离子介导的信号通路而上调,锌离子螯合剂TPEN能切断这一通路,提高耐药株对顺铂的敏感程度。此部分工作构建的NP-NaHCO3-CDDP-TPEN能够被顺铂耐药株A549-DDP摄取并进入溶酶体,且它在酸性条件下对顺铂的释放量高于中性环境下,说明NP-NaHCO3有潜力应用于克服细胞对顺铂的耐药性。本部分工作仍在进行中。