【摘 要】
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无论是急性伤口还是慢性伤口,都严重影响患者的生活质量,加重其经济压力,因此促创伤愈合研究受到越来越多的重视。创伤愈合过程涉及炎症反应、血管新生、组织细胞增殖和重塑,在创伤愈合过程中加快炎症期进程和促血管新生尤其重要。王不留行黄酮苷（VAC）和刺桐碱（HYP）是从王不留行中提取分离的两种的单体,前期研究发现,VAC能促伤口愈合、促内皮细胞增殖和血管再生;HYP能抑制脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞和内
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无论是急性伤口还是慢性伤口,都严重影响患者的生活质量,加重其经济压力,因此促创伤愈合研究受到越来越多的重视。创伤愈合过程涉及炎症反应、血管新生、组织细胞增殖和重塑,在创伤愈合过程中加快炎症期进程和促血管新生尤其重要。王不留行黄酮苷（VAC）和刺桐碱（HYP）是从王不留行中提取分离的两种的单体,前期研究发现,VAC能促伤口愈合、促内皮细胞增殖和血管再生;HYP能抑制脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞和内皮细胞炎症。本论文主要将壳聚糖（CS）制备纳米水凝胶并包裹VAC和HYP改善药物的递送效率、提高治疗效果、降低药物的副作用,并探究其在急性和慢性创伤愈合进程中作用。本研究首先将CS和三聚磷酸钠（TPP）通过离子交联法制备VAC-NPS纳米水凝胶并进行表征,进一步应用于急性创伤治疗。通过TEM分析其形貌;Zeta PALS分析其粒径和电位;流变仪分析其在不同温度下的粘性;FT-IR分析VAC与NPS的相互作用;高效液相色谱（HPLC）测定其包封率、载药量和体外释放率。细胞实验结果表明,VACNPS具有良好的生物相容性。划痕实验和Transwell实验发现VAC-NPS对HUVECs内皮细胞有促迁移作用。动物实验通过构建大鼠全层皮肤开放性伤口模型,结果表明VACNPS组比VAC组伤口愈合速度更快。提取不同时间段的皮肤组织,HE染色观察伤口恢复情况,免疫组化和蛋白印迹分析其在伤口愈合过程中血管再生及炎症因子的表达,发现VAC-NPS可以上调炎症期的IL-1β和TNF-α的表达,还能促血管新生上调了CD31和PDGF-BB的表达,加速急性创伤愈合进程。慢性伤口主要是由于炎症期阻滞、创伤部位微生物大量繁殖、血管再生困难等一系列原因导致的难以愈合。考虑到HYP抗炎作用,制备了HYP-NPS并进行表征。细胞实验结果表明HYP-NPS能抑制LPS诱导的RAW 264.7炎症因子TNF-α和IL-1β的m RNA表达,动物实验通过构建链脲佐菌素（streptozotocin）诱导大鼠糖尿病模型,待血糖稳定后构建开放性伤口模型,发现HYP-NPS组与HYP组相比更好的促慢性伤口愈合。蛋白免疫印迹和免疫组化分析创伤皮肤组织,发现HYP-NPS下调了创伤皮肤中促炎因子IL-1β和TNF-α的表达,加速慢性创面由炎症期向组织再生期的转变。VAC和HYP对创伤愈合都有着显著的效果,考虑到慢性创伤愈合成因的复杂性,同样方法制备VAC+HYP-NPS并对其进行表征,细胞实验通过划痕实验和Transwell实验发现VAC+HYP-NPS能明显促进LPS诱导的HUVECs细胞迁移,q PCR分析发现VAC+HYPNPS能明显抑制LPS诱导的HUVECs细胞中炎症因子TNF-α和IL-1β的表达。动物实验采用大鼠糖尿病开放性伤口模型,并通过免疫组化分析在创伤不同时期皮肤组织中CD31、TNF-α和IL-1β的表达水平,发现VAC+HYP-NPS通过促血管再生和加速炎症期向组织再生期转变加速慢性伤口愈合进程。
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