NK/T细胞淋巴瘤（NKTCL）是一种起源于NK细胞/NK样T细胞的非霍奇金淋巴瘤亚型,在东亚较欧洲及北美国家更常见,其生存期短,具有高度侵袭性,预后差的特点。大部分NKTCL患者处于I/II期,放疗可明显改善这部分患者预后。对于Ⅲ/IV期NKTCL患者,传统化疗方案疗效欠佳,含L-门冬酰胺酶/培门冬酶的化疗方案显示出一定疗效。然而,对于晚期或复发NKTCL,治疗效果仍然不理想。因此,需要积极寻找治疗NKTCL的新靶点新方法。Hedgehog（Hh）信号通路在胚胎发育、组织形态演变以及干细胞生成中起着重要作用。约25%的肿瘤中都发现了Hh信号通路的异常表达,且越来越多的证据表明Hh信号通路表达异常与多种血液恶性肿瘤密切相关。同时有研究提示白血病干细胞的维持和扩散作用有赖于Hh信号通路,阻断Hh信号通路有望彻底清除白血病干细胞。Hh信号通路已成为靶向治疗血液恶性肿瘤的研究热点。因此,本研究探索NKTCL患者病理组织及NKTCL细胞株中Hh信号通路表达情况以期获得抗NKTCL Hh信号通路理论基础。进而进行阻断NKTCL细胞Hh信号通路的体内外研究,旨在寻找靶向NKTCL的新靶点新方法。本研究共分为以下四个部分:第一部分NK/T细胞淋巴瘤中Hedgehog信号通路的表达及意义目的:探索NKTCL患者病理组织、NKTCL细胞株中Hh信号通路的表达情况及临床意义。材料和方法:（1）收集福建医科大学附属泉州第一医院2011-2018年间被诊断为NKTCL的病理组织石蜡标本30例,淋巴结反应性增生（LRH）病理组织石蜡标本10例。所收集NKTCL病例均由资深病理科医师确诊。应用免疫组织化学技术检测Smoothened（Smo）蛋白、Glioma associated oncogene 1（Gli1）蛋白的表达水平,并统计分析其与各临床指标的相关性。（2）对健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）、NKTCL细胞株（SNK6细胞、SNT8细胞）进行Western Blot检测Hh信号通路蛋白的表达水平。结果:（1）30例NKTCL患者病理组织中,Smo、Gli1阳性表达率分别为66.7%（20/30）和73.3%（22/30）,均明显高于LRH的阳性表达率（0%、20%）,差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.05）,且Smo表达与Gli1表达呈现正相关的关系（P<0.05）;（2）NKTCL患者病理组织Smo表达与性别、年龄、ECOG评分、Ann Arbor分期、B症状、LDH、EBER、IPI评分、PINK评分均无关;NKTCL患者病理组织Gli1表达与患者的EBER指标呈正相关（P<0.05）,与性别、年龄、ECOG评分、Ann Arbor分期、B症状、LDH、IPI评分、PINK评分均无关;（3）SNK6细胞、SNT8细胞中Shh、Ptch1、Smo、Sufu、Gli1蛋白均在表达,而PBMC中未见表达。结论:（1）NKTCL患者病理组织中Hh信号通路异常激活;（2）NKTCL患者Gli1表达与EBER表达相关;（3）NKTCL细胞株中Hh信号通路异常激活。第二部分Hedgehog信号通路抑制剂对NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响目的:体外细胞实验探索Hh信号通路抑制剂（Smo抑制剂Sonidegib、Gli1抑制剂GANT 61）对NKTCL细胞的增殖、凋亡及Hh信号通路蛋白表达的影响。材料和方法:分别利用Sonidegib/GANT 61处理NKTCL细胞株（SNK6细胞、SNT8细胞）后,采用CCK8法测定细胞增殖、Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡以及Western Blot检测Hh信号通路蛋白表达水平的影响。结果:（1）Sonidegib抑制SNK6细胞、SNT8细胞增殖,作用呈剂量依赖性;Sonidegib诱导SNK6细胞、SNT8细胞凋亡,作用呈剂量依赖性和时间依赖性;Sonidegib下调Smo蛋白表达水平的同时下调Gli1蛋白表达水平;（2）GANT 61抑制SNK6细胞、SNT8细胞增殖,作用呈剂量依赖性;GANT 61诱导SNK6细胞、SNT8细胞凋亡,作用呈剂量依赖性和时间依赖性;GANT 61下调Gli1蛋白表达水平。结论:（1）Sonidegib通过阻断Hh信号通路Smo蛋白及下游Gli1蛋白抑制NKTCL细胞增殖,诱导细胞凋亡;（2）GANT 61通过阻断Hh信号通路Gli1蛋白抑制NKTCL细胞增殖,诱导细胞凋亡。第三部分Smo对NK/T细胞淋巴瘤细胞生物学行为的影响及机制目的:体外细胞实验探索RNA干扰技术（RNAi）沉默Smo基因对NKTCL细胞增殖、凋亡的影响及其抗肿瘤机制。材料和方法:利用Smo沉默慢病毒感染NKTCL细胞株（SNK6细胞、SNT8细胞）,通过嘌呤霉素筛选后经荧光显微镜、Real-time PCR、Western Blot验证Smo沉默稳定细胞株。采用CCK8法测定细胞增殖,Annexin V-PE/7-AAD检测细胞凋亡,Western Blot检测Gli1、程序细胞死亡蛋白配体1（PD-L1）等蛋白表达水平。结果:（1）荧光显微镜观察Smo沉默SNT8稳定细胞株sh Smo SNT8细胞携带绿色荧光、Real-time PCR显示sh Smo SNT8细胞Smo基因表达水平下调、Western Blot显示sh Smo SNT8细胞Smo蛋白表达水平下调;（2）与SNT8细胞及sh Control SNT8细胞相比,sh Smo SNT8细胞增殖受抑制,细胞凋亡增多,Gli1蛋白表达水平下调同时PD-L1蛋白表达水平也出现下调。结论:沉默Smo基因阻断Hh信号通路抑制NKTCL细胞增殖,诱导细胞凋亡,可能通过调控PD-L1而发挥抗NKTCL作用。第四部分沉默Smo基因对NK/T细胞淋巴瘤移植瘤的作用目的:构建Smo沉默NKTCL NCG小鼠移植瘤模型,体内动物实验探索沉默Smo基因对NKTCL移植瘤生长的影响。材料和方法:分别将实验组sh Smo SNT8细胞、对照组Sh Control SNT8细胞注入小鼠皮下,建立人NKTCL小鼠移植瘤动物模型。定期监测测量肿块大小以判断肿瘤增长速度。实验终止时处死小鼠,分离移植瘤。免疫组织化学技术分析Smo蛋白表达水平。结果:对照组移植瘤在接种5天开始逐渐局部成瘤,成瘤生长速度较快,成瘤率100%（4/4）。实验组移植瘤在接种12天开始逐渐局部成瘤,1只未成瘤,成瘤率80%（4/5）。实验组移植瘤重量低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。实验组Smo蛋白表达水平低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:成功构建Smo沉默NKTCL NCG小鼠移植瘤模型,沉默Smo基因阻断Hh信号通路抑制NKTCL小鼠移植瘤的生长。综上所述,NKTCL患者病理组织及NKTCL细胞株中Hh信号通路均异常激活。通过Hh信号通路抑制剂或RNAi基因沉默方式阻断Hh信号通路均能够有效抑制NKTCL细胞增殖,诱导细胞凋亡,且发现其抗肿瘤作用可能是通过调控PD-L1实现。故Hh信号通路可作为潜在的抗NKTCL靶点。