目的本研究目的在于观察miR-140及程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-Ligand1,PD-L1)在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性,进一步检测上调miR-140的胃癌间充质干细胞(GCMSC)对胃癌细胞增殖、凋亡及PD-L1表达的影响,并以PBMC模拟胃癌细胞的免疫环境,观察miR-140表达上调的GCMSC细胞对胃癌细胞免疫逃逸的影响,探讨其可能通过靶向抑制PD-L1逆转免疫逃逸的机制,为胃癌的诊断、预后评估、免疫治疗、干细胞治疗及靶向治疗提供研究基础数据。方法1.以qRT-PCR及Western blot检测胃癌组织、配对癌旁正常胃组织及四株胃癌细胞中miR-140及PD-L1表达及与肿瘤直径及TNM分期的关系;2.从胃癌组织抽提胃癌间充质干细胞(GCMSC),从癌旁正常胃组织抽提胃间充质干细胞(NGMSC),观察miR-140差异表达;3.以拟似剂上调GCMSC中miR-140表达,以CCK-8法及流式细胞术检测GCMSC诱导的HGC-27细胞增殖及凋亡变化;4.观察miR-140上调的GCMSC干预的HGC-27细胞在PBMC(peripheral blood mononuclear cell)条件下的免疫逃逸影响,以ELISA法检测miR-140mimics转染GCMSC干预条件下HGC-27细胞诱导PBMC分泌免疫炎性相关因子TNFα、IL-6、IFNγ及IL-4的水平变化;5.以qRT-PCR及Western blot检测miR-140 mimics/GCMSC干预的胃癌HGC-27细胞PDL-1表达水平变化;6.生物信息学预测miR-140与PD-L1靶向调控关系,双荧光素酶实验验证二者直接靶向调控关系。结果1.在胃癌组织中miR-140表达低于癌旁正常组织(P<0.05),与肿瘤直径及TNM分期呈现负相关(P<0.05);PD-L1 m RNA及蛋白表达高于癌旁正常组织(P<0.05),与肿瘤直径及TNM分期呈现正相关(P<0.05)。2.miR-140在胃癌间充质干细胞表达明显低于胃间充质干细胞(P<0.001)。3.与HGC-27细胞比较,给予胃癌间充质干细胞GCMSC干预后HGC-27细胞存活率上升(P<0.001),凋亡率下降(P<0.05);与HGC-27细胞或GCMSC/HGC-27细胞比较,给予转染miR-140 mimics GCMSC细胞干预的HGC-27细胞存活率下降(P<0.01;P<0.001),细胞凋亡率上升(P<0.05;P<0.01)。4.在GCMSC干预的HGC-27细胞,经PBMC干预后,HGC-27细胞生存率无改变(P>0.05),GCMSC诱导HGC-27细胞免疫逃避。在miR-140 mimics GCMSC/HGC-27及HGC-27细胞,经PBMC干预后细胞生存率比无PBMC干预下降(P<0.01;P<0.01),上调GCMSC细胞miR-140表达逆转了HGC-27免疫逃逸。上调胃癌间充质干细胞中miR-140表达对胃癌细胞诱导的PBMC分泌免疫细胞因子具有促进作用。5.miR-140 mimics/GCMSC干预的胃癌HGC-27细胞PDL-1 m RNA及蛋白表达均降低,PD-1蛋白降低(P<0.05)。6.双荧光素酶报告显示,PD-L1是miR-140直接靶点。结论1.miR-140在胃癌组织中表达下调,PD-L1在胃癌组织中表达上调,与肿瘤直径及TNM分期相关。2.上调miR-140表达的胃癌间充质干细胞抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡。3.上调miR-140表达的胃癌间充质干细胞逆转胃癌细胞免疫逃逸。4.miR-140靶向抑制PD-L1逆转胃癌间充质干细胞诱导的胃癌细胞免疫逃逸。