【摘 要】
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目的基于N-硝基-左旋精氨酸甲酯（L-NAME）所致的新西兰兔宫内生长受限（IUGR）模型,探讨超声引导胎兔腹腔微创注射乌司他丁（UTI）对其胎肺发育的影响。方法选取新西兰孕兔共20只,将其随机分成4组:分别是正常组、IUGR组、IUGR+UTI组（UTI组）、IUGR+UTI+磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂（LY294002）组（LY组）,每组5只。IUGR组、UTI组和LY组三组于孕24～29天在孕
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目的基于N-硝基-左旋精氨酸甲酯（L-NAME）所致的新西兰兔宫内生长受限（IUGR）模型,探讨超声引导胎兔腹腔微创注射乌司他丁（UTI）对其胎肺发育的影响。方法选取新西兰孕兔共20只,将其随机分成4组:分别是正常组、IUGR组、IUGR+UTI组（UTI组）、IUGR+UTI+磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂（LY294002）组（LY组）,每组5只。IUGR组、UTI组和LY组三组于孕24～29天在孕兔脖颈处皮下缓慢注射L-NAME建立IUGR模型。于孕25天,超声引导下UTI组胎兔腹腔注射20000U/ml UTI溶液0.05ml,LY组注射UTI和LY294002的混合液0.05ml（混合液中UTI浓度为20000U/ml、LY294002浓度为0.5mg/ml）,正常组和IUGR组注射等量生理盐水。孕30天行剖宫产得新生兔并测量体重、胎盘重量,留取新生兔支气管肺泡灌洗液（BALF）,液质联用串联质谱法检测BALF中二棕榈胆碱酯磷酸（DPPC）含量,ELISA检测灌洗液中白细胞介素-6（IL-6）含量。取肺组织切片用以HE染色观察肺组织病理形态,并进行辐射状肺泡计数（RAC）及肺间质比例测定;以透射电镜观察II型肺泡上皮细胞（AEC II）病理形态学改变。免疫组化检测肺组织切片肺表面活性物质相关蛋白-A（SP-A）表达水平;采用TUNEL检测肺组织细胞凋亡的情况。留取肺组织行硝酸还原酶法测一氧化氮（NO）含量,Western-blot法测定磷酸化蛋白激酶B（P-Akt）和磷酸化内皮型一氧化氮合酶（P-e NOS）蛋白表达水平。结果1、IUGR组中有64.1%的新生兔出现IUGR,正常组IUGR发生率仅为7.8%,IUGR组的IUGR发生率明显高于正常组,差异具有统计学意义,本研究中动物模型建立成功。2、与正常组比较,IUGR组、UTI组、LY组新生兔体重及胎盘重量明显减轻（P0.05）。3、IUGR组新生兔肺组织中合成、分泌DPPC及SP-A较正常组明显减少（P<0.05）,UTI组DPPC、SP-A含量与IUGR组的相比明显升高（P<0.05）,但还没达到正常组的水平（P<0.05）。LY组DPPC、SP-A含量较UTI组减少（P<0.05）。4、与正常组的肺间质比例相比,IUGR组的明显增加（P<0.05）;与IUGR组相比,UTI组肺间质比例降低（P<0.05）,但未达正常组水平（P<0.05）;LY组肺间质比例较UTI组增高（P<0.05）。IUGR组较正常组RAC明显降低（P<0.05）;与IUGR组相比,UTI组RAC增加（P<0.05）,但未达正常组水平（P<0.05）,LY组RAC较UTI组降低（P<0.05）。5、正常组AEC II细胞板层小体丰富,胞浆内未见明显糖原颗粒,胞膜游离端微绒毛形态规则;IUGR组AEC II细胞板层小体数量明显减少,胞浆内可见大量糖原颗粒沉积,胞膜游离端微绒毛形态不规则,部分可见微绒毛脱落;UTI组AEC II细胞板层小体较丰富,胞浆内可见散在分布的糖原颗粒,胞膜游离端微绒毛形态欠规则;LY组AEC II电镜下表现与IUGR组相近。6、正常组肺组织切片未见明显或仅有极个别细胞出现凋亡,IUGR组及LY组可见较多的细胞出现凋亡,UTI组有少数细胞出现凋亡。7、与正常组相比,IUGR组肺组织P-Akt、P-e NOS、NO含量明显降低（P<0.05）;与IUGR组相比,UTI组肺组织P-Akt、P-e NOS、NO含量增高（P<0.05）,但未达正常组水平（P<0.05）;LY组较UTI组相比肺组织P-Akt、P-e NOS、NO含量降低（P<0.05）。8、与正常组相比,IUGR组IL-6浓度明显升高（P<0.05）;与IUGR组相比,UTI组IL-6浓度降低（P<0.05）,但未达正常组水平（P<0.05）;与UTI组相比,LY组IL-6浓度增高（P<0.05）。结论乌司他丁通过PI3K/Akt/e NOS/NO信号通路增加由L-NAME诱导的IUGR胎兔肺组织NO的含量,促进肺发育及板层小体的合成和分泌,减少肺组织细胞凋亡,从而提高肺组织SP-A及DPPC的含量,减少炎症因子IL-6的释放,对IUGR兔肺发育有一定的促进和保护作用。
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