【摘 要】
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目的:建立成人心肌细胞（humandcardiac myocytes,HCM）缺氧/复氧（hypoxia/areoxygenation,H/R）损伤模型,研究不同浓度瑞芬太尼后处理对HCM H/R损伤的保护作用;进一步探讨水通道蛋白4（aquaporin-4,AQP-4）在瑞芬太尼后处理对HCM H/R损伤保护中的作用;观察腺苷受体（adenosine receptor,ADR）在瑞芬太尼后处理对
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目的:建立成人心肌细胞（humandcardiac myocytes,HCM）缺氧/复氧（hypoxia/areoxygenation,H/R）损伤模型,研究不同浓度瑞芬太尼后处理对HCM H/R损伤的保护作用;进一步探讨水通道蛋白4（aquaporin-4,AQP-4）在瑞芬太尼后处理对HCM H/R损伤保护中的作用;观察腺苷受体（adenosine receptor,ADR）在瑞芬太尼后处理对HCM保护机制中的作用。方法:本实验中,HCM培养至4～10代以用于后续实验。根据研究设计与要求,具体分组如下:（1）对照组（CON组）:将HCM置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养8 h+2 h。（2）缺氧/复氧组（H/R组）:HCM进行缺氧8 h/复氧2 h处理。（3）缺氧/复氧+0.1、1.0或10.0μM瑞芬太尼后处理组（H/R+0.1、1.0或10.0μM Rem组）:HCM进行缺氧8 h/复氧2 h处理,在缺氧结束前10 min开始分别给予0.1、1.0或10.0μM瑞芬太尼,孵育至复氧结束。（4）AQP-4抑制剂组（H/R+TGN组）:HCM进行缺氧8 h/复氧2 h处理,在缺氧结束前15 min开始给予10.0μM TGN-020（AQP-4抑制剂）,孵育至复氧结束。（5）AQP-4抑制剂+瑞芬太尼后处理组（H/R+Rem+TGN组）:HCM进行缺氧8 h/复氧2 h处理,在缺氧结束前15 min和10 min开始分别给予10.0μM TGN-020和10.0μM瑞芬太尼,共同孵育至复氧结束。（6）ADR拮抗剂组（H/R+Theo组）:HCM进行缺氧8 h/复氧2 h处理,在缺氧结束前15 min开始给予1.0 m M Theophylline（ADR拮抗剂）,孵育至复氧结束。（7）ADR拮抗剂+瑞芬太尼后处理组（H/R+Rem+Theo组）:HCM进行缺氧8 h/复氧2 h处理,在缺氧结束前15 min和10 min开始分别给予1.0 m M Theophylline和10.0μM瑞芬太尼,共同孵育至复氧结束。采用CCK-8（cell counting kit-8）法检测HCM细胞活力。应用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测HCM细胞凋亡率。Fluo-3 AM Ca2+荧光探针用于检测HCM细胞内Ca2+浓度变化。Western blot法用于检测HCM AQP-4、磷酸化胞外信号调节激酶（p-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2）、总胞外信号调节激酶（t-extracellular signal-regulated kinase,t-ERK1/2）的表达水平。结果:（1）细胞活力:与CON组比较,H/R组HCM细胞活力降低（P0.05）。各组t-ERK1/2表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:1)瑞芬太尼后处理可减轻HCM H/R损伤,产生心肌保护作用;2)AQP-4可能参与瑞芬太尼后处理对HCM H/R损伤保护过程,并且这一过程可能与ERK1/2信号通路的激活有关;3)ADR可能参与瑞芬太尼后处理对HCM H/R损伤的保护作用,共同调控AQP-4表达。
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