【摘 要】
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L-天冬氨酸酶是一种重要的工业用酶,可催化富马酸和氨生成L-天冬氨酸的可逆反应.该酶由四个相同亚基构成,每个亚基又由三个结构域D、D、D构成.其中结构域D不仅包含占整个亚基
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L-天冬氨酸酶是一种重要的工业用酶,可催化富马酸和氨生成L-天冬氨酸的可逆反应.该酶由四个相同亚基构成,每个亚基又由三个结构域D<,1>、D<,2>、D<,3>构成.其中结构域D<,2>不仅包含占整个亚基一半还多的氨基酸残基,还是天冬氨酸酶-富马酸酶家族中最保守的结构域.结构域D<,2>在四聚体中聚集形成的20α-螺旋束对于稳定该酶的活性构象十分重要.为了进一步了解L-天冬氨酸酶结构域的功能,我们通过sticky-feetmuntagenesis构建了一个新的基因,它的结构域顺序为D<,3>D<,2>D<,1>,在构建中还删除了C末端的18肽.通过酶的提纯和活性测定,发现该酶仍具有原酶的20.7﹪的活性,K<,cat>、1<,Km>与K<,cat>/K<,m>都有不同程度的下降.而且其最适pH和pH稳定性都向酸性变化,对Mg<2+>的依赖性也大大增强,而热稳定性没有太大变化.关于该突变酶发生这些变化的机制还在进一步分析中.以上结果尚未见报道.
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