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第一部分GOLM1在胶质母细胞瘤患者组织及血清中的表达目的:探究GOLM1在胶质母细胞瘤与正常脑组织中蛋白和mRNA的表达,以及在胶质母细胞瘤患者和健康受试者血清中GOLM1的含量。方法:1.分析GEPIA数据库中207个正常脑组织和163个胶质母细胞瘤样本中GOLM1基因表达情况。2.用q RT-PCR检测8个胶质母细胞瘤组织样品和2个正常脑组织样本中GOLM1的mRNA表达情况。3.用免疫组织化学染色法检测所收集的8个正常脑组织及14个胶质母细胞瘤标本中GOLM1的蛋白表达情况。4.用ELISA检测18位胶质母细胞瘤患者及6位健康受试者血清中GOLM1的含量。结果:1.GEPIA数据库显示在胶质母细胞瘤标本中GOLM1基因的表达高于正常脑组织（P<0.05）。2.q RT-PCR结果显示胶质母细胞瘤中GOLM1的mRNA表达量高于正常脑组织（P<0.05）。3.免疫组化试验显示胶质母细胞瘤标本中GOLM1的蛋白表达高于正常脑组织（P=0.001）。4.ELISA结果显示胶质母细胞瘤患者血清中GOLM1含量远高于健康受试者（P<0.01）。结论:在胶质母细胞瘤中GOLM1的蛋白及mRNA表达量均高于正常脑组织,同时在胶质母细胞瘤患者血清中GLOM1的含量也远高于健康受试者。第二部分沉默GOLM1对胶质母细胞瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响目的:运用siRNA干扰胶质母细胞瘤中GOLM1的表达来研究GOLM1对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:1.运用RNA干扰技术沉默GOLM1在胶质母细胞U87和U251中的表达,通过q RT-RCR与Western Blot筛选出干扰效率最高的一条siRNA,并将其作为实验组,对照组设为转染si NC的细胞。2.通过Edu来测试转染后各组肿瘤细胞的增殖活力。3.通过流式细胞仪分析两组细胞周期变化。4.在无血清条件下通过CCK-8法测试两组细胞的增殖活力,以排除对划痕试验和Transwell试验结果的影响。5.通过划痕实验测试转染后两组肿瘤细胞迁移能力。6.通过Transwell试验测试转染后两组细胞迁移及侵袭能力。结果:1.Western Blot和qRT-RCR均显示siRNA2在蛋白及mRNA水平有更高的干扰效率（P<0.001）,故选用siRNA2作为实验组以开展后续研究。2.Edu结果显示在U87和U251细胞中,实验组的Edu阳性细胞率均低于对照组（P<0.001）。3.流式细胞仪检测结果显示实验组的细胞周期进程受到抑制,特别是在G1/S期（P<0.01）。4.在无血清条件下,实验组和对照组中的U87和U251细胞在转染24小时和36小时的增殖现象均不明显,并且两组结果无明显差异（P>0.05）。5.划痕试验显示在两种细胞系划痕24小时后,实验组伤口愈合明显慢于对照组（P<0.05,P<0.01）。6.Transwell侵袭与迁移试验均显示36小时后试验组中穿过小室的细胞数较对照组少（P<0.01,P<0.001）。结论:干扰胶质瘤细胞U87和U251中GOLM1的表达后,细胞的增殖能力减弱,细胞周期进程受到抑制,主要表现在G1/S期。同时,沉默GOLM1表达后胶质母细胞瘤U87和U251的迁移和侵袭能力都受到不同程度的抑制。第三部分GOLM1通过Wnt/beta-catenin通路影响胶质母细胞瘤的发生发展目的:研究干扰GOLM1表达影响U87和U251细胞增殖和运动的机制,及与Wnt/beta-catenin通路可能存在的相互作用机制。方法:1.用Western Blot检测干扰GOLM1的表达对Cyclin D1、Cyclin E1、c-Myc、p-AKT、Snail、MMP2等蛋白表达的影响。2.用Western Blot检测干扰GOLM1的表达对Wnt/beta-catenin通路相关蛋白beta-catenin、p-GSK3beta及核内beta-catenin蛋白表达的影响。3.用免疫荧光试验检测干扰GOLM1的表达后,实验组及对照组中细胞内GOLM1和beta-catenin的蛋白表达情况及分布情况。结果:1.干扰GOLM1的表达后,实验组中细胞增殖相关蛋白,如Cyclin D1、Cyclin E1、c-Myc、p-AKT等蛋白表达量降低。细胞侵袭与迁移相关蛋白,如Snail、MMP2等蛋白表达量也降低（P<0.05）。2.干扰GOLM1的表达后,Wnt/beta-catenin通路相关蛋白,如beta-catenin和p-GSK3beta等蛋白表达量降低,同时细胞核内beta-catenin的蛋白表达量下降更显著（P<0.05）。3.免疫荧光试验显示在干扰GOLM1表达后实验组中GOLM1和beta-catenin蛋白荧光强度降低,同时核内beta-catenin的荧光强度降低更明显（P<0.05）。结论:沉默GOLM1可能通过抑制beta-catenin进入细胞核来影响Wnt/beta-catenin通路,从而影响胶质瘤细胞U87和U251的增殖活性,迁移和侵袭能力。第四部分体内沉默GOLM1表达对裸鼠成瘤的影响目的:研究沉默GOLM1表达对体内异种移植肿瘤生长的影响方法:1.通过将U87细胞皮下注射到裸鼠的左腋窝中进行异种移植肿瘤生长试验。待皮下成瘤后,将裸鼠随机分为两组。将体内专用siRNA或si NC每3天在肿瘤块中注射一次,持续3周。最后取出肿瘤块并称重。2.用免疫组织化学试验检测两组瘤块中GOLM1、Ki67及Snail的蛋白表达情况。结果:1.干扰GOLM1表达后,实验组肿瘤体积及重量明显小于对照组（P<0.0001）。2.与对照组相比,实验组中GOLM1的表达量明显下降,表示敲低效率较高,增殖指标Ki67及侵袭迁移指标Snail表达量均下降。结论:沉默GOLM1后裸鼠皮下肿瘤生长减缓。