第一部分CCNB1对非小细胞肺癌细胞增殖和周期的影响以及与临床病理特征及患者预后的相关性研究目的:研究细胞周期素B1（CCNB1）对非小细胞肺癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的影响,并通过临床资料及公共数据库芯片数据验证CCNB1与临床病理特征的相关性及CCNB1对肺腺癌患者预后的影响。方法:通过qPCR的方法分别验证CCNB1在非小细胞肺癌细胞系及在肺腺癌组织中的表达情况。设计CCNB1的sh RNA干扰载体和过表达载体,研究CCNB1对非小细胞肺癌细胞的周期、凋亡、增殖、迁移及侵袭的影响。裸鼠皮下成瘤实验验证干扰和过表达CCNB1对A549细胞成瘤能力的影响。从TCGA及GEO下载肺腺癌芯片数据,验证CCNB1与临床病理参数的相关性及对肺腺癌患者生存期的影响。结果:qPCR数据显示CCNB1在多种非小细胞肺癌细胞系及肺肿瘤组织中表达,并且在肺癌组织中CCNB1m RNA水平较癌旁组织有显著差异性（P<0.01）。Western blot显示无论过表达还是干扰CCNB1,细胞中与周期及凋亡相关的蛋白水平无明显变化。另外,CCNB1的表达水平对H1299和A549细胞系的凋亡、迁移及侵袭无明显影响。在细胞周期方面,sh RNA干扰CCNB1后H1299及A549细胞的细胞周期明显阻滞在G2/M期,而且在过表达CCNB1的细胞中,细胞周期也出现阻滞于G2/M期的现象;在对细胞增殖方面,sh RNA干扰CCNB1表达的A549细胞单克隆形成能力明显降低,皮下成瘤能力减弱,当过表达CCNB1后,A549细胞单克隆形成能力及皮下成瘤能力均减弱,但程度较sh RNA干扰组低。肺癌患者临床资料经过单变量及多变量分析后显示,CCNB1m RNA的相对表达水平与患者性别、吸烟状态、T分期及N分期均有明显相关性,并被TCGA数据库的肺腺癌数据集所证实。GEO及TCGA生存数据显示,高表达CCNB1的肺癌患者,总生存期及无病生存期均较低表达组差,差异有显著性。结论:CCNB1对非小细胞肺癌细胞增殖和周期有影响,对非小细胞肺癌的凋亡、迁移及侵袭无影响。CCNB1与肺腺癌患者的临床病理参数有相关性,高表达CCNB1的患者,总生存期及无病生存期均较差。第二部分CCNB1通过UBA52被APC11的泛素化降解促进非小细胞肺癌细胞细胞周期进展及增殖目的:研究CCNB1影响非小细胞肺癌细胞周期的机制,为阐述CCNB1影响非小细胞肺癌患者的预后提供理论依据。方法:通过CCNB1免疫共沉淀的样本行蛋白质谱分析以确定能与CCNB1有相互作用的蛋白,结合文献资料确定以UBA52及APC11为研究对象。分别过表达及干扰UBA52以明确UBA52对CCNB1蛋白水平、细胞周期及增殖的影响,以及通过APC11干扰和过表达以明确APC11与UBA52和CCNB1作用的关系。结果:免疫共沉淀后的蛋白质谱分析发现CCNB1与UBA52有相互作用。过表达UBA52后,CCNB1蛋白水平降低、细胞周期进展及细胞单克隆形成能力增强,干扰UBA52后,CCNB1蛋白水平增高、细胞周期阻滞于G2/M期及单克隆形成能力降低。在过表达CCNB1的细胞中过表达UBA52后,CCNB1蛋白水平有所降低,肺癌细胞的细胞周期进展,细胞单克隆形成能力提高。但在过表达UBA52和CCNB1的细胞中,si RNA干扰APC11的表达后,CCNB1的蛋白水平增高,细胞周期将阻滞在G2/M期,单克隆形成能力降低;当再次过表达APC11后,CCNB1的蛋白水平降低,细胞周期进展加速,单克隆形成能力提高。结论:CCNB1通过UBA52被APC11的泛素化降解促进非小细胞肺癌细胞细胞周期进展和细胞增殖。