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原发性肝癌是威胁人类健康的重要疾病之一,目前关于肝癌的治疗手段以手术切除和化疗为主,然而手术切除治愈率低且易复发;传统的化疗药物无靶向性,毒副作用较大。凶此,寻找更安全有效、靶向性高、毒副作用小的治疗方法非常必要。近年来,载药超声微泡因其本身特性备受人们关注,在超声联合载药微泡治疗肿瘤方面的研究已经取得了一些研究成果。
本文结合本实验室以往的研究成果,本文以聚乳酸为载体,以10-羟基喜树碱(HCPT)为模型药物,采用正交试验设计,采用SPG膜乳化法制备出一定粒径、高载药量和包封率的缓释微泡,并通过MTT细胞毒性实验和小鼠肝癌模型的体内抑瘤实验考察所得微泡本身以及采用联合超声协同作用的抑瘤效果。
本文的具体研究工作如下:
1.载10-羟基喜树碱超声微泡的制备:固定其他条件,单因素考察SPG膜孔径、跨膜压力、乳化剂浓度、分散相与连续相的体积比对载药微泡形态及载药量和包封率的影响,分别筛选出三水平,选用L9(34)表,以载药量和包封率为双重指标,进行正交试验;最终确定膜乳化法制备载10-羟基喜树碱微泡的最佳条件为:SPG膜孔径为1.11μm,跨膜压力为100 Kpa,连续相乳化剂PVA的浓度为1％,分散相与连续相的体积比为1:10。
2.载10-羟基喜树碱超声微泡的表征:对所得微泡的形态、粒径、载药量、包封率、微泡稳定性、HCPT在微泡中的存在形式以及体外释药行为等进行了一系列的考察和表征。结果显示:所得微泡呈规则的球形,表面光滑圆整,粒径较均一,平均粒径为4μm,分散性良好;载药量和包封率分别为1.62％和71.2％,且制备工艺的重复性较好;低温保存下载药微泡的粒径和包封率稳定性良好,60Co-γ射线灭菌基本不影响微泡的形态和包封率。HCPT在载药超声微泡中以无定形状态存在,与游离药物相比,微泡制剂更有利于药物释放,在超声作用下微泡破裂可加速药物溶出。
3.载10-羟基喜树碱超声微泡联合超声的抑瘤效果研究:分别以Bel-7402肝癌细胞和荷H22肝癌实体瘤的小鼠为模型,进行体外细胞增殖抑制率和体内肿瘤抑制率的研究,研究结果表明:在体外,载10-羟基喜树碱聚乳酸微泡造影剂能够有效抑制细胞增殖,同等剂量下,协同超声辐照对细胞的增殖抑制更为显著;在体内载药微泡也能有效抑制实体瘤的生长,且抑制效果具有明显的剂量依赖性,同剂量时,超声空化效应能大大提高载药微泡的疗效。而且微泡制剂降低了HCPT的毒副作用。