根癌农杆菌介导的P-IPT基因转化蓝猪耳的研究

来源 :华南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huoyinghaiyangzhixin
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本研究利用限制性内切酶Xba I消化双元载体pCAMBIA1301和载体pSG516并连接然后转化大肠杆菌DH5 α最终得到的双元表达载体pHQIPT,含目的基因P<,SAG12->IPT、GUS报告基因、Hygromycin抗性基因.用冻融法将其导入了根癌农杆菌EHA101.本研究以在组培苗蓝猪耳叶片为外植体,在共培养基中与根癌农杆菌EHA101共培养4d后,GUS瞬时表达检测90﹪的外植体为阳性.GUS染色检测、PCR检测、Southern blot、Northern blot确定九株抗性株为转基因植株.九株转基因株与对照的形态有所不同,表现为侧芽的无限增殖,叶片小且卷曲、根少且短,类似于细胞分裂素的过量表达.推测蓝猪耳幼苗中具有激活SAG12特异启动子的反式作用因子,使得IPT基因过量表达所致.
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