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许多观赏植物的品质都受花叶衰老的影响，而细胞分裂素类植物生长调节剂表现出延迟叶片衰老的作用。本研究以矮牵牛为材料，用根癌农杆菌介导的叶盘转化法将衰老特异启动的合成细胞分裂素的目的基因（ipt基因）导入矮牵牛，使转化植株通过超量表达细胞分裂素生物合成的限速酶-异戊烯基转移酶，提高植株细胞分裂素含量来延迟衰老，进而改善观赏品质。 1．以叶片为外植体的高频再生体系的建立 取矮牵牛幼嫩叶片，常规消毒后接入诱导分化培养基：MS+ZT2.5mg/L+蔗糖3％+琼脂粉0.6％，pH5.8可直接再生出芽，再生频率达到100％；采用的生根培养基：1/2MS+蔗糖3％+琼脂粉0.6％，pH5.8，生根率达100％。 2．有效抑制叶盘愈伤分化的筛选压浓度的确定 将矮牵牛无菌苗叶盘接种到含不同Km浓度的分化培养基中，测验其对愈伤诱导的抑制效果。结果表明抑制叶盘愈伤分化的筛选压Km浓度为50mg/L。 3．农杆菌介导的矮牵牛叶盘遗传转化体系的建立 矮牵牛的最适转化条件：切取矮牵牛无菌苗的叶片大小为5×5mm2，以OD600=0.2的农杆菌菌液感染15min，暗培养3～4d后用含500mg/L Cef的液体MSO培养基振荡脱菌2h，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干水分，然后接入MS1+200mg/L Cef的培养基上延迟筛选3～6d，再转入MS1+200mg/L Cef+50mg/L Km培养基上进行筛选分化培养。将得到的长约1cm的芽切下接入1/2MS+10mg/L Km中进行生根筛选，移栽能够正常生根的抗性苗并做进一步的鉴定。 4．转化植株的PCR鉴定 提取农杆菌质粒DNA和经过生根筛选的转化植株总DNA，进行目的基因的PCR扩 西南农业大学二见三年硕士学位论文 摘要增鉴定。经电泳检测，26个抗性株中有8个扩出了与阳性对照相同的条带，初步证明外源基因已插入植物基因组中。5．转基因矮牵牛的表型观察 本研究得到的转基因植株早期主要表现为叶片缩小，节间缩短，侧芽增多和根生长缓慢；还有一些抗性芽叶片极度缩小，节间极短，不断的分生侧芽并不能生根。后期转基因植株表现出明显的延迟花叶衰老。