【摘 要】
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目的:对从新疆紫草中提取并分离得到的乙酰阿卡宁体外抗肿瘤活性进行筛选,并对其诱导黑色素瘤A375细胞凋亡机制研究。方法:1 MTT法检测乙酰阿卡宁对ECA109、EAC、A375、A2780、MCF-7细胞增殖的抑制作用。2 CCK-8法检测不同浓度不同时间下乙酰阿卡宁对A375细胞的抑制作用;细胞集落形成实验检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞集落形成的影响;倒置显微镜观察不同浓度乙酰阿卡宁对A
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目的:对从新疆紫草中提取并分离得到的乙酰阿卡宁体外抗肿瘤活性进行筛选,并对其诱导黑色素瘤A375细胞凋亡机制研究。方法:1 MTT法检测乙酰阿卡宁对ECA109、EAC、A375、A2780、MCF-7细胞增殖的抑制作用。2 CCK-8法检测不同浓度不同时间下乙酰阿卡宁对A375细胞的抑制作用;细胞集落形成实验检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞集落形成的影响;倒置显微镜观察不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞形态的影响;流式细胞术检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞周期的影响;划痕实验检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞凋亡的影响;Hoechst33342/PI双染法检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞凋亡形态学变化;荧光显微镜观察不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞内ROS水平的影响,激光共聚焦显微镜检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞线粒体膜电位的影响;Western Blot法检测不同浓度乙酰阿卡宁对A375细胞内Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-9、LC3、p62蛋白表达量的影响。结果:1乙酰阿卡宁对上述5中肿瘤细胞均具有一定的抑制能力,其中A375细胞为乙酰阿卡宁的最敏感细胞株。2乙酰阿卡宁对A375细胞增殖的抑制作用具有时间和剂量依赖性;乙酰阿卡宁能抑制A375单个细胞形成集落的能力;乙酰阿卡宁将A375细胞周期阻滞在G2/M和G1期,影响细胞周期进程;乙酰阿卡宁能够抑制A375细胞的迁移;乙酰阿卡宁能影响A375细胞形态,诱导细胞凋亡,产生活性氧,线粒体膜电位下降;乙酰阿卡宁能够促进A375细胞中Bax、Cleaved Caspase-9、p62蛋白的表达,促进A375细胞中LC3I向LC3II转化,抑制A375细胞内Bcl-2的表达。结论:1乙酰阿卡宁具有较好的抗肿瘤活性,能够有效抑制肿瘤细胞的增殖,2乙酰阿卡宁对黑色素瘤A375细胞的抑制作用,可能通过诱导细胞ROS产生,线粒体膜电位下降,促进细胞凋亡,促进细胞发生自噬而产生。乙酰阿卡宁可作为抗黑色素瘤潜在候选药物之一。
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