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背景和目的： 微小 RNA(microRNA,miRNA)是一类大小约22个核苷酸的保守非编码RNA,能够与下游靶基因mRNA的3’UTR碱基配对并引导基因沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)降解mRNA或抑制mRNA的翻译,参与生物合成和肿瘤的发展。肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生、发展及转移是一个多步骤多因素参与的复杂过程。迄今为止,对肝细胞癌组织进行miRN A分子差异表达谱分析的研究也十分有限。目前已有研究表明miR-18a在肝癌组织的表达水平较癌旁正常组织高。我们前期研究结果显示肝癌患者血清中miR-18a水平较健康人高。本课题拟在此基础上进一步探讨miR-18a对肝癌细胞侵袭迁移的影响并阐明其作用机制。 方法： 1、用脂质体介导的转染方法将miR-18a阻遏物(inhib itor),miR-18a阻遏物阴性对照组(inhibitor negative control,inhibitor NC)分别转染肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15。通过transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用transwell迁移实验及划痕实验检测细胞迁移能力。 2、生物信息学方法预测Dicer1为miR-18a的靶基因。用脂质体介导的转染方法分别将靶向沉默Dicer的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)与miR-18a inhibitor共转染肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15,并设置Dicer siRNA的阴性对照(negative control siRNA,siRNANC)与miR-18a inhibitor共转染为对照组,以及miR-18a inhibitor组、inhibitor NC对照组,transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,transwell迁移实验及划痕实验检测细胞迁移能力,westem blot检测Dicer l蛋白表达,观察miR-18a对肝癌细胞侵袭、迁移的影响是否通过抑制Dicer1表达发挥。 结果： 1、Tra ns we ll侵袭及迁移实验结果显示:与对照组比较,转染miR-18a inhib itor72h后,HepG2及HepG2.2.15细胞侵袭和迁移能力均显著降低,平均每高倍视野(×200)侵出小室的细胞数与NC组相比均显著减少,HepG2细胞miR-18a inhibitor组分别为NC组的0.410倍、0.446倍(P<0.01);HepG2.2.15细胞miR-18ainhibitor组分别为NC组的0.565倍、0.602倍(P<0.01)。 划痕实验显示HepG2及HepG2.2.15细胞划痕后24h、48h、72h,miR-18ainhibitor组划痕愈合速度明显慢于NC组(均 P<0.05)。 2、Western blot检测及transwell侵袭及迁移实验结果显示:与转染inhibitorNC组相比,转染miR-18ainhibitor组48h后细胞中Dicer1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),transwell显示细胞侵袭和迁移能力均显著减弱,平均每高倍视野(×200)侵出小室的细胞数与NC组相比均显著减少,HepG2细胞miR-18ainhibitor组分别为NC组的0.462倍、0.460倍(P<0.01);HepG2.2.15细胞miR-18ainhibitor组分别为NC组的0.574倍、0.579倍(P<0.01)。与共转染siRNANC+miR-18ainhibitor组相比,共转染DicersiRNA+miR-18ainhibitor48h后细胞中Dicer1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),同时transwell显示细胞侵袭和迁移能力均显著增强,平均每高倍视野(×200)侵出小室的细胞数与siRNA-NC+miR-18ainhibitor组相比均显著增多,HepG2细胞DicersiRNA+miR-18ainhibitor组分别为siRNA-NC+miR-18ainhibitor组的2.079倍、2.193倍(P<0.01);HepG2.2.15细胞DicersiRNA+miR-18ainhibitor组分别为siRNA-NC+miR-18ainhibitor组的1.619倍、1.777倍(P<0.01)。划痕实验显示HepG2及HepG2.2.15细胞划痕后24h、48h、72h,共转染DicersiRNA+miR-18ainhibitor组划痕愈合速度明显快于siRNANC+miR-18ainhibitor组(均 P<0.05)。证明了miR-18a通过负向调控Dicer l的表达影响肝癌细胞的侵袭、迁移能力。 结论： 1、MiR-18a促进肝癌细胞的侵袭、迁移。 2、MiR-18a促进肝癌细胞的侵袭、迁移的作用通过靶向抑制Dicer1表达而发挥。