【摘 要】
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该文根据国内猪附红细胞体病的研究现状,对采集于广东部分猪场临床疑似Eperythrozoon suis感染血样和阳性感染猪群疑似感染仔猪脾脏摘除后不同时期的血样,进行鲜血压片检查、
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该文根据国内猪附红细胞体病的研究现状,对采集于广东部分猪场临床疑似Eperythrozoon suis感染血样和阳性感染猪群疑似感染仔猪脾脏摘除后不同时期的血样,进行鲜血压片检查、血片姬姆萨染色、吖啶橙染色和扫描电镜观察,并对部分的E.suis感染阳性仔猪进行血液生理指标的测定.结果表明,E.suis附着于红细胞表面或游离于血浆中,呈球形,直径在0.3~1.5μm之间,多为0.3~0.6μm.姬姆萨染色后,附着在红细胞表面的E.suis呈紫红色的圆点状,有时可见其周围有淡兰色的环绕,似环形.疑似感染仔猪在脾脏摘除后第5天,血液中E.suis数量开始上升,红细胞感染率在18%~60%之间波动,而多数疑似E.suis感染血样看不到典型的病原.E.suis感染阳性猪以红细胞数减少、血红蛋白浓度(HBG)和红细胞比容(HCT)显著降低为主要指征,出现严重的贫血症.根据实验所得的E.suis广东株型16S rRNA基因的序列,设计合成种特异性引物,以E.suis广东株型16S rRNA基因的重组质粒作为阳性参照,建立了E.suis PCR检测方法.该方法能特异性扩增522bp的E.suis 16S rRNA基因片段,而对猪丹毒丝菌G4T10株、猪链球菌ST171株、多杀性巴氏杆菌EO630株、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体、鸡毒支原体和猫血巴尔通氏体CA株的基因组DNA没有扩增带出现.对E.suis基因组DNA的最小检测量约为160pg.试验检测38份临床样品,其中8份为E.suis感染阳性,其余为阴性.为了建立一种高敏感性和特异性的E.suis定量检测方法,该实验将E.suis广东株型和GenBank中注册的各种血营养菌16S rRNA基因序列进行比对,以E.suis和各种血营养菌的16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f/HM-r,在反向引物的5端用生物素标记,扩增出标记有生物素的PCR产物.同时以E.suis广东株型16S rRNA基因的可变区序列设计种特异性寡核苷酸探针,探针的5端用地高辛标记.通过扩增产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,然后与地高辛标记的E.suis种特异性探针杂交,再与辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体反应和相应的底物进行检测,首次成功地建立了E.suisPCR-微孔板杂交-酶免疫法定量检测体系.
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