【摘 要】
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猪圆环病毒2型(PCV-2)是引起断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一，PMWS在国内外猪场广泛流行，已给养猪业带来了很大的经济损失，引起世界各国的广泛重视。 PCV-
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猪圆环病毒2型(PCV-2)是引起断乳仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一，PMWS在国内外猪场广泛流行，已给养猪业带来了很大的经济损失，引起世界各国的广泛重视。
PCV-2全基因序列长1767bp或1768bp，基因组含有11个开放阅读框(ORF)，其中ORFl与ORF2为两个主要的阅读框。ORFl编码与病毒复制相关的Rep蛋白；ORF2基因长702bp，编码233个氨基酸，编码的蛋白为病毒的主要结构蛋白，核衣壳蛋白-Cap蛋白，分子量为30Kda，具有较好的免疫原性，对PCV的诊断与疫苗研究有较大的意义。
本研究根据GenBank中发表的已知PCV-2全基因序列，自行设计A、B两对特异性引物，从本实验室保存的4株PCV-2的细胞毒悬液中抽提病毒DNA，进行PCR扩增，并把扩增的基因克隆到pMDl8-T载体上。对克隆的A、B段基因进行测序，用Primer5.0和DNAstar分析软件进行拼接，获得PCV-2全基因序列；将获得的序列与GenBank中发表的国内外其他参考毒株进行核苷酸同源性比较并用遗传发育树进行了分析。
根据所测4株PCV-2全基因序列，设计一对引物P1、P2，用PCR方法扩增PCV-2的ORF2基因。为后期构建表达载体的需要，在上游引物P1中引入HindⅢ限制性内切酶位点，在下游引物P2中引入EcoRI酶切位点。把ORF2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中，构建了重组真核表达质粒pcDNA-ORF2。通过脂质体法和磷酸钙法把重组真核表达质粒介导转染至哺乳动物细胞(Vero细胞)中，进行瞬时表达。
本研究对广东地区的4个PCV-2毒株全基因序列和GenBank中发表的某些国内外参考毒株进行了比较，在分子水平上对PCV-2的流行病学进行了初步探讨和分析；成功构建了编码PCV-2结构蛋白ORF2基因的真核表达载体pcDNA-ORF2，并应用脂质体法和磷酸钙法介导转染Vero细胞,用间接免疫荧光法证明了ORF2基因编码的结构蛋白具有很好的抗原性，为进一步研制PCV诊断试剂盒或疫苗奠定了基础。
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