【摘 要】
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microRNA（miRNA）是一类由内源基因编码的长度为18-24个核苷酸的非编码单链RNA分子,在各物种间具有较高的保守性。miRNA在细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭、转移等方面起着重要作用。课题组基于前期高通量测序结果,发现miRNA-10a-5p在鸡成肌细胞的增殖期（GM）低表达,在分化期（DM）的表达持续升高,而BCL6基因的表达趋势与之恰恰相反。本研究锁定miRNA-10a-5p和BCL
【基金项目】
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江苏省自然科学基金（BK20181453）; 江苏省高等学校优势学科建设工程项目（PAPD）
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microRNA（miRNA）是一类由内源基因编码的长度为18-24个核苷酸的非编码单链RNA分子,在各物种间具有较高的保守性。miRNA在细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭、转移等方面起着重要作用。课题组基于前期高通量测序结果,发现miRNA-10a-5p在鸡成肌细胞的增殖期（GM）低表达,在分化期（DM）的表达持续升高,而BCL6基因的表达趋势与之恰恰相反。本研究锁定miRNA-10a-5p和BCL6基因,针对其在鸡成肌细胞增殖、分化以及凋亡过程中的作用开展了相关功能性实验。主要结果如下:1.miRNA-10a-5p在胸肌和腿肌中的表达成相反的趋势,在胸肌中E12-D1表达整体趋势是先下降后上升,再下降。而在腿肌中E12-D1表达整体呈现先上升后下降,再上升。在增殖实验中发现,miRNA-10a-5p能显著下调CyclinD1和CyclinE的表达（P＜0.01）,同时处于S期的细胞比例显著减少（P＜0.01）,细胞的增殖活力显著降低。细胞分化检测表明,miRNA-10a-5p能显著下调MYOD1和 MYOG 基因的表达（P＜0.05 或 P＜0.01）。此外,miRNA-10a-5p 能使MYOD1和MYHC的蛋白表达、肌管面积均显著减少（P＜0.01）。最后,在凋亡检测中发现miRNA-10a-5p会促进鸡成肌细胞的凋亡,与凋亡相关的基因Caspase3和Fas表达量的显著升高（P＜0.001）,早期凋亡和晚期凋亡的细胞比例显著提高（P＜0.05或P＜0.001）。综上所述,miRNA-10a-5p会抑制鸡成肌细胞的增殖和分化、促进成肌细胞的凋亡。2.采用miRanda软件和miRBase数据库等预测获得miRNA-10a-5p的候选靶基因BCL6。通过qRT-PCR检测过表达miRNA-10a-5p后BCL6的表达,结果显示BCL6的表达被显著抑制（P＜0.05）,而干扰miRNA-10a-5p显著上调BCL6基因的表达（P＜0.05）。双荧光素酶报告系统结果表明miRNA-10a-5p和BCL6具有靶向关系。CCK8挽救实验结果显示,BCL6能够回复miRNA-10a-5p对成肌细胞增殖的抑制作用。综合上述结果,表明miRNA-10a-5p和BCL6具有靶向关系。3.BCL6基因在胸肌和腿肌中各个时期的表达趋势基本相同,均是先上升随后降低,不同的是胸肌表达量降低的拐点是在E20,而在腿肌中则是在E18。在鸡成肌细胞中,BCL6的表达会使CyclinD1和CyclinE的表达显著上调（P＜0.05或P＜0.01）,同时显著增加S期细胞的数量（P＜0.01）,G0G1期的细胞显著减少（P＜0.01）,细胞的增殖活力显著提高（P＜0.05）;BCL6能够使与分化相关的MYOD1、MYOG基因的mRNA表达量的显著上调（P＜0.05）,同时MYOD1、MYHC蛋白的表达水平也有显著上升,并且肌管面积显著增加（P＜0.01）。最后在细胞凋亡检测中发现,BCL6的上调会使Caspase3和Fas的表达受到显著抑制（P＜0.05）,晚期凋亡细胞占比显著降低（P＜0.05）。以上结果表明,BCL6基因能够促进鸡成肌细胞的增殖和分化,而抑制鸡成肌细胞的凋亡。
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