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目的:胰腺癌是一种致死性很高的消化系统恶性肿瘤,是预后最差的恶性肿瘤之一。在过去的三十年中,很多肿瘤的五年生存率得到了明显提高,但胰腺癌的死亡率却缓慢增加。2010年至2016年期间所有癌症的5年相对存活率为67%,而胰腺癌的存活率只有不到10%,是所有肿瘤中最低的,中国胰腺癌患者的中位生存期通常不到7、8个月。因此,迫切需要研究胰腺癌病理发展机制,发现特异的诊断指标和潜在治疗靶点。胰腺癌发生发展是由多种基因改变驱动的,包括EGFR染色体缺陷、K-RAS突变、TP53、SMAD4和CDKN2A抑癌基因失活等。非编码RNA是一种常见的表观遗传方式,在表观遗传调控中发挥重要作用。越来越多的证据表明,大量非编码RNA（nc RNA）对正常发育至关重要,并对癌症等疾病产生重要影响。环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一种结构稳定、具有调控基因表达功能的内源性非编码RNA,在多种生物体内具有组织特异性表达。Circ RNAs可以起到mi RNA海绵的作用,作为一种内源性竞争RNA参与转录后调控,可与RNA结合蛋白相互作用调控m RNA表达,一些circ RNAs还可编码翻译多肽和蛋白进而影响生物体功能。已有研究表明,circ RNAs在肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和胰腺癌等多种恶性肿瘤中发挥重要作用。胰腺癌组织和细胞系中存在大量异常表达的circ RNAs,它们可以调控胰腺癌的发生、发展,并影响治疗敏感性,甚至可以作为诊断和判断预后的生物标志物。尽管部分circ RNAs在胰腺癌中已有研究,但还有众多的可能发挥重要功能的circ RNAs与胰腺癌的相关性及作用的分子机制尚不明确,尽可能全面而系统地阐明这些circ RNAs的结构和功能,可以更深入地了解胰腺癌的发病机制,并为其诊断和治疗提供新的策略。方法:1、本研究通过整合GEO数据库GSE69362和GSE79634数据集中的环状RNA数据,通过R语言limma包分析差异表达基因,WGCNA寻找肿瘤相关共表达基因,筛选出与胰腺癌相关性最高且差异表达的环状RNA,通过q RT-PCR在多个胰腺癌细胞系中验证,筛选出差异表达明显并且和生信分析结果相一致的hsa＿circ＿0006502。2、构建慢病毒稳转hsa＿circ＿0006502过表达胰腺癌细胞系,通过CCK-8实验检测过表达hsa＿circ＿0006502后胰腺癌细胞的增殖能力;使用流式细胞术测定胰腺癌细胞的凋亡情况;通过Transwell实验测定胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。3、通过circbank网站预测hsa＿circ＿0006502潜在结合的mi RNAs,通过R语言limma包分析GEO GSE71533数据集中胰腺癌差异表达的mi RNAs,两者结果取交集得到mi R-10a-5p,通过q RT-PCR检测hsa＿circ＿0006502过表达细胞株和对照组中mi R-10a-5p表达水平,并通过双荧光素酶报告基因活性检测验证两者之间的直接结合关系。通过高通量测序检测过表达hsa＿circ＿0006502的胰腺癌细胞和亲本细胞的差异表达基因,与TCGA数据库胰腺癌中表达下调的m RNA和targetscan网站预测的mi R-10a-5p靶基因三者取交集,筛选出mi R-10a-5p的下游靶基因PTEN。通过q RT-PCR检测了过表达mi R-10a-5p后PTEN表达水平的变化,通过双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的直接结合关系。进行挽救实验,分为四组:阴性对照组、hsa＿circ＿0006502过表达组、hsa＿circ＿0006502过表达+mi R-10a-5p过表达组、hsa＿circ＿0006502过表达+mi R-10a-5p过表达+PTEN过表达组,分别进行转染,之后通过CCK-8实验、Transwell实验和Western Blot实验检测细胞功能变化和PTEN表达变化。4、将hsa＿circ＿0006502过表达的胰腺癌细胞和对照胰腺癌细胞皮下接种到裸鼠侧腹,建立小鼠异种移植模型,检测不同时间肿瘤体积变化,通过q RT-PCR检测了小鼠肿瘤组织中hsa＿circ＿0006502、mi R-10a-5p和PTEN的表达水平,验证体内hsa＿circ＿0006502的作用及作用机制。结果:1、本研究通过分析GEO数据库胰腺癌中环状RNA数据,筛选出胰腺癌中12个基因既是低表达同时又与肿瘤负相关;118个基因高表达的同时又和肿瘤正相关。经过验证,hsa＿circ＿0006502在所有5个胰腺癌细胞系中均表达下调,与生信预测结果一致。2、CCK-8、流式细胞术以及Transwell实验结果显示,过表达的hsa＿circ＿0006502显著减少胰腺癌细胞增殖,促进胰腺癌细胞凋亡,并抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。3、GSE71533数据集差异分析发现,mi R-10a-5p在胰腺癌中高表达,并且circbank网站预测hsa＿circ＿0006502与mi R-10a-5p具有潜在结合位点,q RT-PCR验证了hsa＿circ＿0006502能够负性调控mi R-10a-5p表达,双荧光素酶报告基因实验进一步证实,hsa＿circ＿0006502-野生序列与mi R-10a-5p mimics共转染组荧光强度显著降低,hsa＿circ＿0006502能够与mi R-10a-5p靶向结合。通过高通量测序、TCGA数据库数据分析和targetscan网站预测,筛选出mi R-10a-5p的下游靶基因PTEN。QRT-PCR结果显示,mi R-10a-5p能够负性调控PTEN表达。双荧光素酶报告基因实验进一步证实,mi R-10a-5p能够靶向结合PTEN。细胞功能恢复实验发现,hsa＿circ＿0006502和mi R-10a-5p共转染组中,mi R-10a-5p可以完全逆转hsa＿circ＿0006502过表达对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。Hsa＿circ＿0006502、mi R-10a-5p和PTEN共转染组中PTEN过表达逆转了mi R-10a-5p过表达对胰腺癌细胞表型的影响。Western Blot实验结果显示,hsa＿circ＿0006502过表达显著增加了胰腺癌细胞PTEN的表达水平,mi R-10a-5p共转染能够逆转过表达hsa＿circ＿0006502造成的PTEN表达水平改变。上述实验证实,hsa＿circ＿0006502可以通过吸附mi R-10a-5p正向调控PTEN的表达水平。4、小鼠荷瘤实验显示,hsa＿circ＿0006502过表达组肿瘤体积小于对照组,证实过表达hsa＿circ＿0006502能够在体内抑制胰腺癌细胞生长,且hsa＿circ＿0006502过表达组移植瘤组织中hsa＿circ＿0006502表达水平显著增加,mi R-10a-5p表达水平显著降低,PTEN表达水平显著增加。结论:1、生信分析发现hsa＿circ＿0006502在胰腺癌组织中低表达,且与胰腺癌显著负相关。QRT-PCR验证显示,hsa＿circ＿0006502在胰腺癌细胞系中表达量显著降低,与生信分析的结果一致。2、Hsa＿circ＿0006502能够显著抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,同时促进胰腺癌细胞的凋亡,发挥抑癌基因的作用。3、Hsa＿circ＿0006502通过靶向结合mi R-10a-5p正向调控PTEN表达,抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制小鼠移植肿瘤的生长,进而抑制胰腺癌的进展。