microRNA(miRNA)是一类长度在21个核苷酸左右，进化上保守的RNA分子。它通过实现转录后水平的调控，进而参与各项生命活动。猪肌肉发育受到众多基因的调控，近年发现microRNA在骨骼肌的生长发育过程中发挥着极为重要的作用。我们的前期研究发现，miR-423-5p(miRNA-423-5p)在猪骨骼肌不同发育过程中呈现出显著的差异表达，提示miR-423-5p可能通过靶向某些特定基因参与骨骼肌的生长发育调控。但至今未发现miR-423-5p参与猪骨骼肌生长发育调控机制的有关报道。因此本研究以miR-423-5p为主要研究对象，筛选其靶基因，并探讨它们在猪骨骼肌生长发育过程中所发挥的作用。主要研究结果如下:　　1.运用TargetScan等生物信息学软件预测到SRF基因是猪miR-423-5p的一个潜在靶基因。　　2.采用qRT-PCR的方法检测了广西巴马小型猪miR-423-5p与SRF基因在5个不同日龄背最长肌中的表达情况，同时绘制了miR-423-5p的组织表达谱。结果显示:广西巴马小型猪背最长肌中miR-423-5pmRNA的表达水平随着日龄的增长而不断升高，SRF mRNA的表达水平则呈现不断下降的趋势，两者呈负相关。在不同组织中，miR-423-5p均有表达，其中在心脏中表达量最高，在背最长肌、脑和肾中表达量也相对较高，在肝和脾中表达量相对较低。　　3.利用克隆技术将miR-423-5p的前体序列连接到pLV-CMV-3xflag-EF1-GFP(pLV)慢病毒载体上成功构建了pLV-miR-423-5p重组载体，同时转染C2C12细胞，qRT-PCR检测结果显示过表达成功。　　4.针对SRF基因设计引物，通过克隆技术将含有结合位点的SRF3UTR片段以及结合位点缺失的SRF3UTR片段插入到Psi-checkTM-2 vector中构建靶标正常载体SRF-WT和靶标突变载体SRF-MUT，然后转染PK15细胞系。利用双荧光素酶报告基因检测系统分析其荧光素酶活性，结果显示:WT组的荧光值极显著低于MUT组和NC组，miWT组的荧光值极显著低于miMUT、miNC和inWT组(P＜0.01)，MUT组与NC组间差异不显著，miMUT、miNC和inWT组之间差异也不显著(P＞0.05)。这一结果表明，miR-423-5p能与SRF基因相互作用，抑制其表达，SRF基因为miR-423-5p的一个靶基因。　　5.诱导C2C12细胞分化，收集细胞进行qRT-PCR检测，结果显示:随着C2C12细胞的分化，miR-423-5p mRNA表达量呈明显的上升趋势，分化到第5天时有下降趋势;SRF mRNA表达量随着C2C12细胞的分化呈明显的下降趋势，分化到第5天时有上升趋势，两者表达趋势刚好相反，呈负相关性表达。在C2C12细胞分化过程中，MyoG mRNA表达量呈明显的上调趋势;MyoD则在分化第0天和1天时表达量最高，到第3天时急剧下降而后慢慢上调。　　6.C2C12细胞转染miR-423-5p mimic/inhibitor后更换分化培养基继续培养48h，收集细胞进行qRT-PCR检测，结果显示:转染miR-423-5p mimic的细胞，成功过表达miR-423-5p;转染miR-423-5p inhibitor细胞的miR-423-5p表达受到抑制。当过表达miR-423-5p时，SRF mRNA表达量与对照组比下降，但差异不显著(P＞0.05);MyoD和MyoG mRNA表达量显著下降(P＜0.05)。相反，当miR-423-5p表达受到抑制时，SRF mRNA表达量高于对照组，但差异不显著(P＞0.05); MyoD和MyoG mRNA表达量显著上调(P＜0.05)。ELISA结果表明当过表达miR-423-5p时，SRF蛋白浓度与对照组比显著下降(P＜0.05)，而miR-423-5p表达受抑制时，SRF蛋白浓度与对照组比显著上升(P＜0.05)。这些结果进一步表明SRF是miR-423-5p的靶标基因，且miR-423-5p主要在翻译水平下调SRF的表达。　　综上所述，我们揭示了miR-423-5p可能参与肌肉生长发育的调控机制，即miR-423-5p通过抑制靶标基因SRF对肌肉分化进行负向调控，并最终调控骨骼肌的生长发育。