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目的:临床研究通过收集帕金森病（Parkinson’s Disease,PD）伴自主神经功能障碍的病例,观察水木和宁方治疗PD伴自主神经功能障碍的临床疗效。实验研究基于泛素蛋白酶体途径（ubiquitin-proteasome system,UPS）,通过构建帕金森病体外细胞模型,探讨水木和宁方治疗PD的作用机制。方法:1.收集本院帕金森病伴自主神经功能障碍的患者100例,随机分为治疗组和对照组,每组50人。治疗组予中药水木和宁方联合美多芭治疗,对照组单用美多芭治疗,共治疗8周。治疗后对患者进行帕金森病运动功能评定量表（Unified Parkinson’s Disease Rating Scale Part III,UPDRS-III）、自主神经症状量表（The Scale for Outcomes in PD for Autonomic Symptoms,SCOPA-OUT）、便秘评分系统（constipation scoring system,CSS）、帕金森病中医证候积分、中医证候疗效评定进行评分,采用SPSS26.0进行统计学分析,评估水木和宁方的临床疗效。治疗过程中进行安全性评估,记录患者不良反应。2.采用MTT比色法筛选造模药物1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-Methyl-4-phenylpyridinium,MPP+）、中药水木和宁方、美多芭作用于PC12细胞最佳药物浓度,通过MPP+诱导PD体外细胞模型,以最佳浓度的中药水木和宁方、美多芭分别干预PC12细胞,24小时后测定细胞OD值,计算细胞存活率,进一步探讨水木和宁方和美多芭对细胞存活率的影响。3.通过MPP+诱导PD体外细胞模型,分别予水木和宁方和美多芭进行药物干预,药物作用24小时后,采用Real-time PCR法检测α-syn、TH以及与UPS相关的Ub、UCH-L1、Parkin、UBE1的m RNA的表达情况,采用Western blot法检测α-syn、TH以及与UPS相关的Ub、UCH-L1、Parkin、UBE1蛋白表达情况。结果:1.临床研究:（1）基线分析:两组患者的性别、年龄、病程、文化水平、合并疾病、H-Y分级均无显著性差异,表明基线一致,具有可比性（P＞0.05）（2）PD运动功能评定:两组均可以降低患者UPDRS-III评分,改善PD患者运动症状,且治疗组在改善患者运动症状上优于对照组（P＜0.05）;（2）PD自主神经功能障碍评定:水木和宁方合用美多芭可以明显降低患者SCOPA-OUT评分,改善患者消化、泌尿、心血管、体温调节、生殖系统等自主神经功能症状,缓解患者便秘严重程度,且效果优于单用美多芭（P＜0.05）;（3）中医证候疗效评定:两组都可以降低患者中医证候积分,改善中医证候,治疗组总体疗效（84%）优于对照组（68%）（P＜0.05）;（4）药物安全性评定:水木和宁方服药期间无明显不良反应,药物安全性良好。2.当MPP+浓度升高时,PC12细胞活力呈下降趋势,MPP+浓度为1 mmol/L时,PC12细胞的存活率为50.57%,我们以1 mmol/L作为MPP+构建PD细胞模型最佳浓度。体外实验结果表明在一定浓度范围内,水木和宁方和美多芭对PC12细胞没有毒性,随着药物浓度的增加,细胞存活率下降。通过MTT比色法获得水木和宁方作用于PC12细胞最佳药物为6mg/m L,美多芭作用于PC12细胞最佳药物浓度为3.125μg/m L。水木和宁方和美多芭都可以提高PC12细胞存活率,有效抑制MPP+对PC12细胞的损伤,因此对PC12细胞具有保护作用,且水木和宁方组对PC12细胞保护作用优于美多芭组（P＜0.05）。3.Real-time PCR结果示,与对照组比较,MPP+组α-syn m RNA表达明显上调,TH、UBE1、Parkin、UCH-L1、Ub m RNA表达明显下调（P＜0.05）;与MPP+组比较,水木和宁方组α-syn m RNA表达明显下调,TH、UBE1、Parkin、UCH-L1、Ub m RNA表达明显上调（P＜0.05）;与美多芭组比较,水木和宁方组α-syn m RNA明显下调,TH、UCH-L1、Ub m RNA表达明显上调（P＜0.05）。Western blot结果发现,与对照组比较,MPP+组的α-syn表达明显上调,TH、UBE1、Parkin、UCH-L1、Ub表达明显下调（P＜0.05）;与MPP+组比较,水木和宁方组α-syn表达明显下调,TH、UBE1、Parkin、UCH-L1、Ub表达明显上调（P＜0.05）。与美多芭组相比,水木和宁方组α-syn蛋白明显下调,TH、UCH-L1、Ub蛋白表达明显上调（P＜0.05）。结论:1.水木和宁方联合美多芭不仅可以改善肝肾亏虚、痰瘀阻络型帕金森病患者运动症状,还可以改善患者自主神经功能障碍,改善中医证候,且临床疗效上优于单用美多芭,临床安全性可靠。2.水木和宁方可抑制MPP+对PC12细胞的损伤,对PC12细胞具有保护作用,且对细胞保护作用优于单用美多芭。3.水木和宁方通过调控泛素蛋白酶体途径,能够加强UPS降解底物蛋白的功能,从而促进α-syn泛素化及降解进程,减少α-syn的异常聚集,进而对DA能神经元产生保护作用,发挥抗帕金森病的治疗作用。