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目的:以典型肾阳虚证患者作为研究对象,采用实时定量PCR基因芯片技术,从Toll样蛋白受体(Toll-like receptors,TLRs)信号传导通路的角度,探讨肾阳虚证患者的免疫功能失调机制。 方法:1.根据中医专家诊断及40项肾阳虚证评定量表评定,确诊14例肾阳虚证患者作为实验组;选择10例健康志愿者作为正常对照组。 2.分别采集实验组和对照组外周血,提取外周血白细胞,抽提细胞总RNA之后逆转录合成cDNA,采用实时定量PCR基因芯片技术检测TLRs信号通路相关基因的表达水平; 3.采用2-ΔΔCt法计算实验组和对照组的TLRs信号通路基因RNA的表达量,采用2-ΔΔCt法计算肾阳虚证组和健康对照组对应基因的表达差异。以Student’s t检验比较两组之间2-ΔΔCt值的差异,P<0.05被认为差异有统计学意义。 结果:与健康对照组比较,肾阳虚证组中共获得29条特异性差异表达基因,其中4个基因表达上调,25个基因表达下调。上调基因包括FOS、HSPA1A、MYD88、TOLLIP,下调基因包括CD14、CD180、CLEC4E、ECSIT、HRAS、ILIB、IRF1、JUN、LY86、LY96、MAP3K1、MAPK8IP3、NFKB2、NFKBIA、PELI1、TBK1、TLR1、TLR10、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9。上调基因约占差异表达TLRs通路基因总数的13%,下调基因约占差异表达TLRs通路基因总数的86%,表明差异基因表达以下调为主。其中有9个基因在TLRs信号通路中表达下调,2个表达上调,并且下调基因主要集中在TLRs信号通路的上游。 结论:肾阳虚证患者TLRs信号通路上多个分支通路的多个相关基因表达水平均发生了改变,这些异常表达的相关因子涉及TLR家族基因、激活TLRs信号通路的受体、接头蛋白基因、与TLRs相互作用的蛋白基因等。表明TLRs信号通路可能是导致肾阳虚证发病的一条重要免疫调节信号通路之一,该通路的异常调控与肾阳虚证免疫功能失调的发生密切相关。