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目的观察甲状腺肿瘤患者IL-6水平变化,探讨不同中医临床证型和不同肿瘤类型患者IL-6水平变化,为临床诊疗提供依据。方法1.记录患者姓名,住院号或门诊号,性别,年龄,病程,及一般基本信息等。2.检测甲状腺功能激素包括游离甲状腺素、游离三碘原氨酸、促甲状腺激素;抗甲状腺过氧化物酶抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等。3.使用化学发光法检查血清IL-6水平。4.甲状腺超声检查评估甲状腺肿瘤大小,有恶性征象者行甲状腺细针穿刺及细胞学检查。结果1.与肉瘿病患者相比,石瘿病患者IL-6水平明显增高,具有统计学意义。2.与肝郁痰凝证患者相比,气滞痰凝证和痰瘀互结证患者IL-6水平升高,具有统计学意义。3.与肝郁痰凝证患者相比,气滞痰凝证和痰瘀互结证患者中甲状腺癌的比例明显增高,具有统计学意义。4.与良性结节相比,甲状腺癌患者IL-6水平明显升高,具有统计学意义。5.与良性结节＜1.0cm的患者比较,良性结节≥1.0cm的患者IL-6水平显著增高,具有统计学意义;与良性结节＜1.0m的患者相比,甲状腺癌患者IL-6水平都明显升高,具有统计学意义。结论1.IL-6 水平升高与甲状腺肿瘤的中医诊断类型和临床证型具有相关性,对其诊治具有一定指导意义。2.IL-6水平升高与甲状腺结节良恶性及大小关系密切,是甲状腺肿瘤危险因素之一。目的观察IL-6对人甲状腺干细胞增殖与分化的影响,探讨IL-6在甲状腺肿瘤的发病机制中的作用。方法1.甲状腺细胞和甲状腺干细胞的提取和培养。2.采用BrdU ELISA法检测甲状腺干细胞的增殖能力。3.采用sphere形成实验观察IL-6对甲状腺sphere细胞形成的影响。4.采用实时定量PCR检测甲状腺干细胞相关基因八聚体结合转录因子4（OCT4）,ATP结合转运蛋白2（ABCG2）以及分化相关基因钠碘转运体（NIS）、甲状腺球蛋白（TG）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、促甲状腺素受体（TSHR）、成对盒基因8（PAX8）的表达。5.采用免疫荧光染色观察IL6对甲状腺干细胞OCT4表达的影响。结果1.IL-6促进甲状腺sphere细胞形成。提取人甲状腺细胞后,进行悬浮培养24小时后,予以不同浓度的IL-6培养7d,随着IL-6浓度逐渐增高,sphere细胞的形成率逐渐增高,且sphere细胞大小呈浓度依赖性。2.IL-6促进甲状腺干细胞的增殖。通过BrdU ELISA检测发现IL-6刺激48h后,甲状腺干细胞增殖加快,呈剂量依赖性。3.IL-6单克隆抗体抑制甲状腺干细胞的增殖。使用Anti-IL-6阻断48h后,甲状腺干细胞的增殖被显著抑制,并且抑制效果与Anti-IL-6浓度呈剂量依赖。4.IL-6促进甲状腺干细胞相关基因的表达。实时定量PCR结果显示,20ng/m1 IL-6能够显著促进甲状腺干细胞的OCT4mRNA、ABCG2mRNA的表达,但对GATA4mRNA无显著影响。5.甲状腺干细胞中OCT4的荧光免疫测定。IL-6干预的甲状腺干细胞OCT4富集的荧光度显著高于空白对照组,但加入IL-6单克隆抗体阻断后荧光度显著降低。6.IL-6对甲状腺干细胞分化细胞形态学的影响。与TSH细胞培养相比,IL-6处理的甲状腺细胞小而紧密,且不同于原代甲状腺细胞。7.IL-6抑制甲状腺干细胞分化标志物基因的表达。20ng/ml IL-6显著抑制NISmRNA,TGmRNA,TPOmRNA 表达,而对 TSHRmRNA 及 PAX8mRNA无显著影响。结论1.IL-6促进甲状腺sphere细胞形成与增殖。提示IL-6可促进甲状腺干细胞的增殖能力。2.IL-6促进甲状腺干细胞相关基因表达,同时IL-6可抑制甲状腺干细胞向甲状腺细胞的分化。提示IL-6可能诱导甲状腺细胞形成过程中发生变异,产生未分化细胞,进而导致肿瘤的发生。目的观察IL-6对甲状腺癌肿瘤干细胞干性特性及上皮-间质转化的影响,探讨IL-6对甲状腺肿瘤的增殖与侵袭的作用机制。方法1.采用甲状腺肿瘤干细胞培养技术,培养甲状腺未分化癌细胞株HTh74及耐药株HTh74R肿瘤干细胞。2.采用sphere细胞形成实验观察IL-6对HTh74及HTh74R sphere细胞形成率。3.采用MTT法检测IL-6对HTh74及HTh74R肿瘤干细胞增殖。4.采用克隆形成实验观察IL-6对HTh74及HTh74R细胞克隆形成的影响。5.实时定量PCR检测IL-6对HTh74及HTh74R肿瘤干细胞相关基因OCT4、ABCG2及CD133的表达以及上皮-间质转化相关基因E-cadherin,Vimentin及Snail的表达。6.Western blot实验检测细胞信号通路IL-6/JAK1/STAT3/OCT4蛋白水平在HTh74及HTh74R肿瘤干细胞的表达。7.采用siRNA干扰技术检测STAT3-siRNA阻断IL-6对HTh74及HTh74R肿瘤干细胞的增殖作用。结果1.IL-6能够促进HTh74和HTh74R sphere细胞形成。在培养液中加入s-IL-6R100ng/ml及不同浓度的IL-6（0-20ng/ml）培养7天后,随着IL-6浓度的增加,sphere细胞形成率越高,且sphere细胞体积增大,数量增多。2.IL-6能够促进HTh74及HTh74肿瘤干细胞的增殖。随着IL-6浓度的增加,HTh74及HTh74R肿瘤干细胞增殖活性亦显著增加,且呈剂量与时间依赖性。3.IL-6单克隆抗体能够显著抑制HTh74及HTh74R肿瘤干细胞的增殖活性。随着IL-6单克隆抗体的浓度逐渐增加,HTh74及HTh74R肿瘤干细胞增殖活性显著下降。4.IL-6能够促进HTh74和HTh74R细胞的克隆形成。克隆实验发现,随着IL-6的浓度的逐渐增加,HTh74和HTh74R细胞的克隆形成率也逐渐增加。5.IL-6能够促进HTh74和HTh74R肿瘤干细胞的干性特征相关基因水平的表达。IL-6能够显著促进HTh74和HTh74R肿瘤干细胞的OCT4、ABCG2基因表达,亦能够促进HTh74R细胞的CD133基因表达。6.IL-6能够促进HTh74和HTh74R肿瘤干细胞上皮-间质转化相关基因E-cadherin的表达明显下降,而Vimentin及Snail的表达水平增加。7.IL-6显著地促进了 HTh74和HTh74R肿瘤干细胞磷酸化JAK1/STAT3水平,OCT4蛋白表达水平也明显增加。而IL-6单克隆抗体能够阻断JAK1/STAT3磷酸化和OCT4蛋白水平。8.STAT3-siRNA能够减少STAT3蛋白的表达,siRNA转染能够减少IL-6促进STAT3的磷酸化。STAT3-siRNA转染明显抑制HTh74和HTh74R肿瘤干细胞的增殖。结论1.IL-6能够促进甲状腺肿瘤sphere细胞的形成,能够促进肿瘤干细胞的增殖和细胞的克隆形成,提示IL-6能够促进甲状腺肿瘤干细胞的增殖能力。2.IL-6能够增加甲状腺肿瘤干细胞干性特征相关基因的表达水平,提示IL-6能够增加甲状腺肿瘤干细胞自我复制,无限增殖的干性特征。3.IL-6能够促进甲状腺肿瘤干细胞上皮-间质转化过程。提示IL-6能够增加甲状腺肿瘤干细胞侵袭与转移能力。4.IL-6通过JAK1/STAT3/OCT4细胞信号通路调节甲状腺肿瘤干细胞的增殖,促进甲状腺肿瘤的发生发展。