红萸饮促进肛瘘术后创面愈合的临床疗效及作用机制研究

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目的:1.观察中药红萸饮口服促进低位单纯性肛瘘术后创面愈合的临床疗效。2.观察中药红萸饮对肛瘘术后患者血清VEGF、创面肉芽组织中COL1、COL3表达的影响。3.研究中药红萸饮含药血清对成纤维细胞增殖、迁移、分泌COL1及COL3的影响,探寻红萸饮促进创面愈合的部分作用机制。方法:1.将60例低位单纯性肛瘘患者随机分为试验组和对照组各30例。术后试验组在常规治疗基础上加中药红萸饮口服治疗,对照组仅采用常规治疗。观察两组术后第3、7、10天的创面渗液量、肉芽生长、创面疼痛评分等疗效性指标,记录创面愈合(创面完全上皮化)所需要的时间,在术后第30天评价总体临床疗效。2.ELISA检测术后第3、7、10天时血清VEGF浓度,比较两组VEGF表达水平。3.免疫组化检测术后第10天时创面肉芽组织中COL1、COL3表达情况。4.以培养基配制的不同浓度的红萸饮含药血清对成纤维细胞(HFF-1)进行干预,细胞模型分为四组:对照组(Crtl)、10%含药血清组(10%HYY)、15%含药血清组(15%HYY)及20%含药血清组(20%HYY)。CCK-8法观察各组在24 h、48 h、72 h的细胞增殖活性,计算细胞增殖率进行分析;细胞划痕实验观察各组在0 h、6 h、12 h、24h的划痕面积,以不同时间点划痕面积的变化评估各组成纤维细胞的迁移速度;免疫组化法观察红萸饮作用于成纤维细胞后各组COL1、COL3的表达量,以平均光密度进行定量分析。结果:1.两组总有效率均为100%,表示两组均有疗效(P>0.05)。术后第3天,两组创面肉芽生长形态评分比较差异无统计学意义(P>0.05),但创面渗液及创面疼痛评分试验组均优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。术后第7、10天试验组在创面肉芽生长、渗液、疼痛评分均优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组愈合时间相比,试验组明显短于对照组,两组差异有统计学意义(P<0.01)。2.术后第3天时,两组血清VEGF浓度比较无统计学意义(P>0.05),术后第7、10天时试验组血清VEGF浓度明显高于对照组(P<0.001)。3.术后第10天两组创面组织中COL1比较,试验组明显高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。两组COL3表达比较,试验组也明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。4.CCK-8实验结果:同一浓度红萸饮含药血清的细胞增殖率均随时间逐渐升高,组间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。同一时间的组内比较,24 h时组内增殖率与浓度成正比,组内两两比较差异有统计学意义(P<0.001);48 h时组内增殖率随浓度逐渐升高,组内两两比较差异有统计学意义(P<0.01);72 h时增殖率也逐渐增高,但15%HYY组与20%HYY组之间的增幅较小,两组增殖率比较没有统计学意义(P>0.05)。划痕实验结果:与对照组相比,第6 h时20%HYY组细胞创面愈合率明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);第12 h时15%HYY组与20%HYY组创面愈合率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);第24 h时20%HYY组与对照组相比创面愈合率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫组化胶原蛋白表达结果:与对照组相比,15%HYY组与20%HYY组COL1表达量均高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,20%HYY组COL3表达量较对照组更多(P<0.05)。结论:1.红萸饮对肛瘘术后的创面具有促进愈合的作用,并能够改善创面早期渗液多、肉芽生长不良及创面疼痛等术后并发症。2.红萸饮在创面愈合中期可促进VEGF表达,促进创面血管新生,改善创面微循环,促进肉芽组织生长良好,更快的填满创面缺损。3.红萸饮能促进创面中期COL1、COL3表达,使创面纤维化,更快进入组织重塑期,缩短创面愈合时间。4.红萸饮刺激成纤维细胞的增殖和迁移,以20%HYY作用更为明显,在一定范围内与时间呈正相关性。在红萸饮的干预下成纤维细胞分泌COL1、COL3表达量增加,提示红萸饮能促进创面组织中胶原蛋白表达可能与促进成纤维细胞增殖有关。5.研究表明红萸饮对肛瘘术后创面愈合的作用是动态的,在多个环节参与创面修复过程,根据创面所处不同的阶段影响不同的生长因子、细胞外基质发挥相应作用,对VEGF和成纤维细胞的调节可能是红萸饮促进创面愈合的其中一部分作用机制。
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