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细胞焦亡作为近年来探明的一种细胞炎性程序性死亡在诸多疾病中扮演着重要的角色。近十年来,研究学者对细胞焦亡的发生机理做了大量的探索,发现并证实了其关键机制,但目前对于干预焦亡的药物研究鲜有报道。本文旨在通过建立稳定的J774A.1巨噬细胞的焦亡模型,从传统中药的活性单体药物中筛选出能够抑制焦亡的药物,并重点探究其作用机制。首先采用不同剂量LPS+ATP/尼日尼亚菌素刺激J774A.1细胞,利用碘化丙啶(PI)染色、CCK-8法、ELISA、western blot等检测手段,以焦亡的表型特征和关键靶点蛋白变化作为评判依据,建立稳定的J774A.1细胞焦亡的联合刺激方式,并进一步利用JSH-23阻断NF-кB通路,探究LPS在其诱导焦亡中的作用。其次分别采用了黄芪甲苷、丹皮酚、厚朴酚、α-香附酮和木犀草素初步探究其对细胞焦亡的胞膜损伤和IL-1β/18细胞因子影响,发现木犀草素具有良好的潜在的抗细胞焦亡的药理作用。最后,进一步探究木犀草素抑制LPS+ATP诱导的J774A.1细胞焦亡的作用效应及其分子机制。试验结果如下:1.LPS+ATP刺激J774A.1细胞后,细胞活力极显著降低(p<0.001),在形态学上表现出细胞膜严重损伤、细胞形态表现出扁平塌陷,细胞因子IL-1β/18释放显著升高(p<0.001),蛋白检测NLRP3、caspase-1 p10、GSDMD p30表达显著上调(p<0.001)。其中100ng/mL LPS预刺激4h加上5 mM ATP刺激30 min为J774A.1最优刺激方式。JSH-23阻断NF-кB后,上述结果较LPS+ATP组均得到显著改善(p<0.01)。2.黄芪甲苷、丹皮酚、厚朴酚、α-香附酮和木犀草素预处理12h后,均极显著抑制LPS+ATP诱导的J774A.1的IL-1β(p<0.001)。其中厚朴酚和木犀草素能显著改善LPS+ATP诱导的IL-18分泌、细胞活力和PI染色阳性率。3.2-8μM木犀草素预处理12 h后,显著上调LPS+ATP诱导的细胞活力(p<0.05)、显著降低IL-1β/18释放(p<0.01)、显著降低PI染色阳性率和LDH释放率(p<0.05),极显著下调NLRP3、caspase-1 p10、GSDMD p30表达(p<0.01)。以上结果表明,100ng/mL LPS预刺激4h加上5 mM ATP刺激30 min稳定建立J774A.1巨噬细胞焦亡模型,其中100ng/mL LPS预处理在促进caspase-1时活化必不可少。2-8μM木犀草素能够显著改善J774A.1焦亡模型形态学上的损伤,显著抑制促炎性细胞因子IL-1β/18释放,并通过NLRP3/caspase-1/GSDMD通路抑制LPS+ATP诱导的J774A.1细胞焦亡。