论文部分内容阅读
目的:明确Tim-3和PD-1在多发性骨髓瘤（MM）患者外周血NK细胞及单核细胞上的表达情况,探讨Tim-3和PD-1对NK细胞、单核细胞抗肿瘤免疫功能的影响及其与多发性骨髓瘤发生发展的关系。方法:1、选择2019年8月至2020年9月期间经病理诊断为多发性骨髓瘤的初诊病例31例,选择同期15例年龄性别无明显差异且排除明显疾患的体检者作为正常对照。2、收集31例MM患者的临床资料,包括性别、年龄、实验室常规检查结果,MM的免疫球蛋白分型及采用Durie-Salmon分期标准进行肿瘤分期的结果,骨髓涂片镜检计数骨髓瘤细胞百分比。3、采集15例正常对照者外周血标本和31例治疗前以及其中10例经3个疗程化疗后完全缓解或部分缓解的MM患者外周血标本经流式细胞术检测其CD3-CD56+NK细胞百分比、CD14+CD64+单核细胞百分比以及Tim-3和PD-1在CD3-CD56+NK细胞、CD14+CD64+单核细胞上的表达情况;采用ELISA方法检测15例正常对照者、21例MM患者治疗前以及10例经3个疗程化疗后完全缓解或部分缓解的MM患者治疗后外周血血清中细胞因子（IFN-γ、TNF-α）水平,电化学发光法检测IL-6水平。统计并分析其与多发性骨髓瘤发生发展的关系。结果:1、31例MM患者临床免疫球蛋白分型情况:Ig G型15例,Ig A型9例,其他类型7例（Ig D型2例、轻链型3例、Ig M型2例）。DS分期情况:I期2例,Ⅱ期8例,Ⅲ期21例。2、Tim-3在MM患者外周血NK细胞和单核细胞上的表达。2.1不同免疫球蛋白分型MM患者之间Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比,Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比均无明显差异（P>0.05）,差异无统计学意义。2.2 MM患者较正常对照外周血CD3-CD56+NK细胞百分比（P=0.121）、CD14+CD64+单核细胞百分比（P=0.071）均无显著变化,差异无统计学意义。但Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比较正常对照显著升高（P=0.025）;Tim-3+CD14+CD64+单核细胞较正常对照也显著升高（P=0.007）,差异均有统计学意义。2.3 Ⅲ期相较Ⅰ–Ⅱ期的MM患者Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比无明显变化（P=0.867）,差异无统计学意义;但Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比显著升高（P<0.0001）。其中10例经3个疗程治疗后完全缓解或部分缓解的MM患者较治疗前Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比显著降低（P=0.046）,Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比也显著降低（P=0.011）,差异均有统计学意义。2.4 MM患者相较正常对照外周血血清中细胞因子水平TNF-α（P=0.014）,IFN-γ（P=0.004）均显著降低,IL-6则显著升高（P<0.0001）,且Ⅲ期相较Ⅰ–Ⅱ期的MM患者IL-6水平显著升高（P=0.0426）,差异均有统计学意义。10例经3个疗程治疗后完全缓解或部分缓解的MM患者较治疗前外周血血清中细胞因子TNF-α（P=0.0009）,IFN-γ（P=0.0004）均显著升高,IL-6则显著降低（P=0.003）。2.5作相关性分析发现,MM患者治疗前Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比与IFN-γ呈负相关（r=-0.514,P=0.017）,Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比与TNF-α也呈负相关（r=-0.728,P=0.002）,均有统计学意义。另外,MM患者初诊时骨髓瘤细胞百分比与Tim-3+CD3-CD56+NK细胞百分比呈负相关（r=-0.109,P=0.561）,但无统计学意义,与Tim-3+CD14+CD64+单核细胞百分比呈正相关（r=0.516,P=0.003）,有统计学意义。3、PD-1在MM患者外周血NK细胞和单核细胞上的表达。3.1不同免疫球蛋白分型MM患者之间PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比,PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比均无明显差异（P>0.05）,差异无统计学意义。3.2 MM患者较正常对照外周血PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比显著升高（P=0.025）,PD-1+CD14+CD64+单核细胞（P=0.007）也显著升高,差异均有统计学意义。3.3 Ⅲ期相较Ⅰ–Ⅱ期的MM患者PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比明显降低（P=0.034）;但PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比显著升高（P<0.001）,差异均有统计学意义。其中10例经3个疗程治疗后完全缓解或部分缓解的MM患者较治疗前PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比显著降低（P=0.0417）,PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比也显著降低（P=0.021）,差异均有统计学意义。3.4作相关性分析发现,MM患者治疗前PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分比与IFN-γ呈负相关（r=-0.896,P<0.0001）,PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比与TNF-α呈负相关（r=-0.568,P=0.007）,均有统计学意义。初诊时骨髓瘤细胞百分比与PD-1+CD3-CD56+NK细胞百分呈负相关（r=-0.136,P>0.05）,但无统计学意义,与PD-1+CD14+CD64+单核细胞百分比呈正相关（r=0.544,P<0.05）,有统计学意义。3.5 MM患者Tim-3和PD-1分别在NK细胞、单核细胞上的表达均呈正相关（NK细胞r=0.564,P<0.05;单核细胞r=0.851,P<0.05）,差异均有统计学意义。结论:1、Tim-3和PD-1在MM患者外周血中NK细胞及单核细胞上的表达水平与MM的免疫球蛋白分型无关,但与MM的肿瘤分期密切相关。2、Tim-3和PD-1在MM患者NK细胞和单核细胞上表达水平增高,可能导致其自身功能障碍,致使其分泌细胞因子异常,介导MM的发生发展及其进程。3、与正常对照组比较,Tim-3和PD-1在MM患者NK细胞和单核细胞上表达水平显著增高,而治疗缓解后较治疗前又显著降低,因此,Tim-3和PD-1可以成为外周血肿瘤筛查检测新的潜在标志物。4、Tim-3和PD-1在MM患者NK细胞及单核细胞上的表达呈正相关,可能存在协同作用,两者共同高表达强化了抑制MM患者NK细胞及单核细胞的抗肿瘤功能,促进了MM的进展。因此针对此两个免疫靶点的联合治疗方案有望成为多发性骨髓瘤免疫治疗的有效策略。