猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)属于动脉炎病毒科(Arteriviridae),动脉炎病毒属(Arterivirus),可引起怀孕母猪流产、早产及断奶仔猪肺炎、生长迟缓等症状,给养猪业带来严重经济损失。因此,建立能够对PRRSV进行现地快速检测的、简便的诊断方法是十分必要的。本试验采用差速离心和蔗糖密度梯度离心法纯化病毒抗原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术融合小鼠脾细胞与SP2/0细胞,融合率为91.4%。用建立间接ELISA方法检测杂交瘤细胞上清,结果阳性率为20.6%。采用有限稀释法进行3次克隆,获得了5株抗PRRSV单克隆抗体(McAb),分别命名为D5、D7、D10、E9和B5。5株McAb腹水的效价分别为1:25600、1:12800、1:6400、1:12800和1:6400。免疫球蛋白亚类鉴定结果显示,D5和B5属于IgG2b亚类,D7、D10和E9属于IgM亚类,而其轻链均为κ链。用原核表达的PRRSV N蛋白对家兔进行多次免疫,制备了兔抗PRRSV N蛋白抗体。免疫胶体金诊断试纸条具有快速、简便等优点,结合单克隆抗体技术又有良好的特异性和敏感性,是目前现地应用最广泛的一种诊断方法。本试验利用柠檬酸三钠还原法制备粒径约为20nm的胶体金,选择抗体效价高,反应活性好且亚类为IgG2b的D5 McAb与20nm的胶体金颗粒结合制备探针,同时将纯化的兔抗PRRSV N蛋白抗体和羊抗鼠IgG包被硝酸纤维素膜(NCM)分别作为检测线(T线)和质控线(C线),组装成检测PRRSV的免疫胶体金诊断试纸条。敏感性试验结果表明,本试验组装的免疫胶体金诊断试纸条可以检出6.25μg/mL纯化的PRRSV抗原。在特异性试验中,用所组装的试纸条对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)进行检测,结果显示,该试纸条只能够检测出PRRSV为阳性,其余均为阴性。在现地试验中,对30份样本进行检测,结果显示,本试验组装的免疫胶体金诊断试纸条检出19份阳性病料,而RT-PCR方法检出21份阳性病料,总符合率为90.0%;阳性符合率为90.5%;阴性符合率为88.9%。