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背景:肝门胆管癌（hilair cholangiocarcinoma）是一种相对罕见但高度恶性的胆管上皮细胞肿瘤，由于诊断困难，死亡率极高。加之肝门胆管癌的生物学特异性，目前临床上认为放化疗对胆管癌治疗效果不明确，外科手术切除术是治疗胆管癌的首先方式，且被认为是治疗胆管癌唯一可能使患者延长其生存期甚至康复的治疗方式，但手术切除并不适合每一个患者，因此肝门胆管癌的治疗面临严峻的挑战。目前对于肝门胆管癌发病的分子机制了解甚少，21世纪以来大量研究发现肝门胆管癌的发病可能与表观遗传学的改变息息相关，抑癌基因通过高甲基化而失活是肝门胆管癌发病的重要机制之一，而人DNA甲基转移酶1（Human DNA methylation transferase1，hDNMT1）是参与DNA复制时甲基化的主要酶之一，hDNMT1在有丝分裂过程中起维持DNA母链与子链甲基化一致性的作用，而hDNMT1在蛋白质水平的表达升高常导致抑癌基因高甲基化而失活，从而促使相关恶性肿瘤的发生。RNAi （RNA interference）技术在基因沉默等相关方面都取得了不少成果，这些为本实验选择RNAi沉默hDNMTI基因的表达提供了理论依据。目的:运用siRNA（small interference RNA）抑制肝门部胆管癌QBC939细胞系中人DNA甲基转移酶1基因的表达，探讨hDNMT1基因表达下调后对胆管癌QBC939细胞抑癌基因甲基化的影响，并初步了解两者之间的机制。方法:根据hDNMT1序列设计并合成发夹式siRNA序列，并以此为模板构建siRNA质粒。通过脂质体转染QBC939细胞，最后以β-actin为内参，经半定量RT-PCR检测hDNMT1、P16、RASSF1A抑癌基因在mRNA水平的表达，以通过RNA干扰技术并分析其对hDNMTI在mRNA水平表达沉默的影响以及P16、RASSF1A抑癌基因在mRNA水平表达的变化；同时通过甲基特异性PCR（Methylationspecific polymerase chain reaction，MSP）检测P16、RASSF1A的甲基化情况，分别了解相关抑癌基因的CpG岛甲基化水平；最后用MTT实验检测转染后的QBC939细胞株的生长活性。结果:经RT-PCR检测表明si-hDNMT1(silence-hDNMT1)可有效抑制QBC939细胞中hDNMT1的转录，同时上调抑癌基因P16、RASSF1A的转录；MSP检测显示，si-hDNMT1可促使P16、RASSF1A的发生去甲基化，并抑制QBC939细胞增殖，抑制率在转染后72h达到峰值。结论:发夹式siRNA沉默hDNMT1可以促进QBC939细胞抑癌基因P16、RASSF1A的去甲基化，从而促使P16、RASSF1A在转录与表达上调，抑制QBC939细胞的增殖。