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目的：本实验以油酸（OA）胶束与鸡蛋清溶菌酶（HEWL）为模拟分子，解析淀粉样蛋白的聚集机制，并比较不同浓度OA胶束以及OA-HEWL 聚合体对 SH-SY5Y 细胞和神经干细胞（NSCs）的生物学效应，初步探讨OA胶束对淀粉样蛋白斑块形成的影响，进一步提高对阿尔兹海默症（AD）病理机制的认识。
方法：为了保持OA胶束构象，所有样品都在800 rpm、pH 2.3和57℃条件下持续摇动；实验运用原子力显微镜（AFM）、ThT结合法、CD光谱法对淀粉样蛋白的纤维化过程进行初步表征。AFM 是研究蛋白质聚集过程中动态变化的重要实验手段，可观察在不同条件下形成的淀粉样蛋白寡聚体、原纤维和纤维的形态结构并测量各结构的高度；采用 ThT 结合法监测蛋白质纤维化的动力学过程；运用 CD 光谱法分析蛋白纤维化过程中蛋白质二级结构变化。采用 WST-1 法和荧光显微镜连续成像法观察不同浓度 OA 胶束以及不同浓度 OA-HEWL聚合体对SH-SY5Y细胞和NSCs的活性影响。
结果： AFM结果显示，与对照组相比，OA100组形成大量的圆形寡聚体，这些寡聚体进一步结合形成纤维状结构，纤维高度最高可达60nm。ThT 荧光染料可与蛋白质中的 β-折叠结构特异性结合，用FluoroMax-2 分光光度计测试蛋白样品的 ThT 荧光强度，结果发现HEWL组、OA10组、OA100组在50h前，OA100组ThT荧光强度最高，但增长率较缓；50h后，HEWL组增长速度最快，ThT荧光强度持续增高，高于OA10组和OA100组，而OA100组荧光强度最低。CD光谱结果显示，10h时，HEWL组、OA10组、OA100组所得曲线在 208nm 处有一最低负峰，此与 α-螺旋结构的特征峰类似，而在7d时，在217nm处有一最低负峰，与β-折叠结构的特征峰一致。WST-1法和荧光显微镜结果显示，与对照组相比，在OA浓度为140μM时，OA对SH-SY5Y细胞和NSCs具有明显的增殖抑制作用（P＜0.01），而当OA与HEWL共孵育后，OA-HEWL对细胞的毒性明显减弱。
结论：OA 胶束与 HEWL 共孵育后可以促进类淀粉样蛋白板块的形成，并能显著降低OA对SH-SY5Y细胞和NSCs的毒性作用。
目的：通过提取高纯度的S100A9蛋白和构建核转录因κB( NF-κB) p65 基因过表达慢病毒载体并转染体外培养的SH-SY5Y细胞，观察S100A9介导的NF-κB（p65）入核动态变化对SH-SY5Y细胞系的生物学效应。方法：利用前期实验成功构建的原核表达质粒 pET28a-S100A9，提取并转化质粒；使用IPTG诱导S100A9蛋白表达；采用SDS-PAGE和WB对S100A9蛋白进行验证；采用镍亲和柱分离并纯化蛋白；透析、浓缩并低温冻干获得蛋白粉；利用 PCR 方法获取目的基因片段RELA(p65) ,并构建慢病毒载体；琼脂糖凝胶电泳鉴定成功后用构建好的慢病毒载体转染293T细胞；以最适的MOI感染SH-SY5Y细胞, 并筛选SH-SY5Y稳转株；运用荧光显微镜和流式细胞术检测病毒转染效率；采用CCK-8 法检测S100A9 蛋白对SH-SY5Y稳转株活性的影响；运用Matlab(R2017a)分析软件分析S100A9蛋白对SH-SY5Y稳转株细胞核内外p65表达量的影响。结果：SDS-PAGE和WB证明成功获取了高纯度蛋白。琼脂糖凝胶电泳显示成功构建p65基因过表达的慢病毒载体；CCK-8结果显示S100A9对SH-SY5Y细胞具有明显增殖抑制作用（P＜0.05），且p65-GFP组的抑制作用没有对照组和空载组强，对照组和空载组二者无显著性差异；荧光显微镜和流式细胞结果显示构建的 SH-SY5Y 稳转株转染率约达 90%，SH-SY5Y稳转株构建成功。Matlab分析结果显示S100A9蛋白可以激活NF-κB 信号通路，引起 p65 入核，且入核与阳性对照 TNF-α 刺激NF-κB入核存在差异。结论：S100A9促进SH-SY5Y细胞增殖抑制可能是激活了NF-κB信号通路。
方法：为了保持OA胶束构象，所有样品都在800 rpm、pH 2.3和57℃条件下持续摇动；实验运用原子力显微镜（AFM）、ThT结合法、CD光谱法对淀粉样蛋白的纤维化过程进行初步表征。AFM 是研究蛋白质聚集过程中动态变化的重要实验手段，可观察在不同条件下形成的淀粉样蛋白寡聚体、原纤维和纤维的形态结构并测量各结构的高度；采用 ThT 结合法监测蛋白质纤维化的动力学过程；运用 CD 光谱法分析蛋白纤维化过程中蛋白质二级结构变化。采用 WST-1 法和荧光显微镜连续成像法观察不同浓度 OA 胶束以及不同浓度 OA-HEWL聚合体对SH-SY5Y细胞和NSCs的活性影响。
结果： AFM结果显示，与对照组相比，OA100组形成大量的圆形寡聚体，这些寡聚体进一步结合形成纤维状结构，纤维高度最高可达60nm。ThT 荧光染料可与蛋白质中的 β-折叠结构特异性结合，用FluoroMax-2 分光光度计测试蛋白样品的 ThT 荧光强度，结果发现HEWL组、OA10组、OA100组在50h前，OA100组ThT荧光强度最高，但增长率较缓；50h后，HEWL组增长速度最快，ThT荧光强度持续增高，高于OA10组和OA100组，而OA100组荧光强度最低。CD光谱结果显示，10h时，HEWL组、OA10组、OA100组所得曲线在 208nm 处有一最低负峰，此与 α-螺旋结构的特征峰类似，而在7d时，在217nm处有一最低负峰，与β-折叠结构的特征峰一致。WST-1法和荧光显微镜结果显示，与对照组相比，在OA浓度为140μM时，OA对SH-SY5Y细胞和NSCs具有明显的增殖抑制作用（P＜0.01），而当OA与HEWL共孵育后，OA-HEWL对细胞的毒性明显减弱。
结论：OA 胶束与 HEWL 共孵育后可以促进类淀粉样蛋白板块的形成，并能显著降低OA对SH-SY5Y细胞和NSCs的毒性作用。
目的：通过提取高纯度的S100A9蛋白和构建核转录因κB( NF-κB) p65 基因过表达慢病毒载体并转染体外培养的SH-SY5Y细胞，观察S100A9介导的NF-κB（p65）入核动态变化对SH-SY5Y细胞系的生物学效应。方法：利用前期实验成功构建的原核表达质粒 pET28a-S100A9，提取并转化质粒；使用IPTG诱导S100A9蛋白表达；采用SDS-PAGE和WB对S100A9蛋白进行验证；采用镍亲和柱分离并纯化蛋白；透析、浓缩并低温冻干获得蛋白粉；利用 PCR 方法获取目的基因片段RELA(p65) ,并构建慢病毒载体；琼脂糖凝胶电泳鉴定成功后用构建好的慢病毒载体转染293T细胞；以最适的MOI感染SH-SY5Y细胞, 并筛选SH-SY5Y稳转株；运用荧光显微镜和流式细胞术检测病毒转染效率；采用CCK-8 法检测S100A9 蛋白对SH-SY5Y稳转株活性的影响；运用Matlab(R2017a)分析软件分析S100A9蛋白对SH-SY5Y稳转株细胞核内外p65表达量的影响。结果：SDS-PAGE和WB证明成功获取了高纯度蛋白。琼脂糖凝胶电泳显示成功构建p65基因过表达的慢病毒载体；CCK-8结果显示S100A9对SH-SY5Y细胞具有明显增殖抑制作用（P＜0.05），且p65-GFP组的抑制作用没有对照组和空载组强，对照组和空载组二者无显著性差异；荧光显微镜和流式细胞结果显示构建的 SH-SY5Y 稳转株转染率约达 90%，SH-SY5Y稳转株构建成功。Matlab分析结果显示S100A9蛋白可以激活NF-κB 信号通路，引起 p65 入核，且入核与阳性对照 TNF-α 刺激NF-κB入核存在差异。结论：S100A9促进SH-SY5Y细胞增殖抑制可能是激活了NF-κB信号通路。