[目的]微小RNA(microRNA,miRNA)是一类对基因进行转录后水平调控的小分子非编码RNA,参与多种生理和病理过程。近年来的研究表明,某些miRNA具有癌基因或抑癌基因活性,这些miRNA能够通过负性调节其靶基因的表达水平,在肿瘤发生和发展过程中发挥重要作用。本实验利用MTT和集落形成方法,发现microRNA-181b(miR-181b)促进宫颈癌细胞生长。本课题进一步确定了与miR-181b直接作用的靶基因,并且研究了该靶基因对宫颈癌细胞生长表型的影响,同时引入NF-κB,研究了 miR-181b与NF-κB之间正反馈环路中的因子,以阐明miR-181b对宫颈癌发生和发展发挥作用的分子机制。[方法]首先利用MTT实验和集落形成实验检测过表达miR-181b后细胞生长活性的变化。之后利用生物信息学方法筛选miR-181b的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验验证miR-181b对靶基因的直接调控作用。利用qRT-PCR和Western blot实验技术检测miR-181b功能增强的宫颈癌细胞中靶基因mRNA和蛋白水平的表达变化,进一步验证miR-181b对靶基因的调控作用。而后又利用RNA干扰技术敲除该靶基因后,通过MTT和集落形成实验检测细胞生长活性的变化,进一步研究了靶基因的功能。还用TUNEL实验研究靶基因对宫颈癌细胞凋亡的影响。之后,分析了 AC9-cAMP参与的NF-κB与miR-181b之间的正反馈环路在宫颈癌细胞中的作用。[结果]MTT和集落形成实验证实,miR-181b有促进宫颈癌细胞生长的作用。靶基因筛选结果表明,腺苷酸环化酶9(AC9)是miR-181b的候选靶基因,其3’UTR区存在miR-181b的潜在结合位点。荧光报告载体实验证实,AC9的3’UTR确实存在miR-181b的直接靶位点,qRT-PCR和western blot方法证明miR-181b可以下调AC9的表达。在AC9功能增强的细胞中,细胞生长受抑,同时AC9还可以促进细胞凋亡。抑制NF-κB的活性之后,NF-κB下游因子的表达下调,miR-181b表达下调,而AC9的表达上调,抑制细胞生长,这与过表达AC9的效果相同。[结论]我们证实miR-181b可以通过靶定AC9下调cAMP含量,这一通路参与到NF-κB与miR-181b的正反馈环路之中。这一 miR-181b表达调节的新机制可以为肿瘤的诊断治疗提供新的线索。