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背景与目的：龋病是人类最普遍的感染性疾病之一，其中变形链球菌被认为是主要的致龋菌。变形链球菌在牙面的粘附、聚集是其致龋作用的第一步，也是最为重要的一步。通过主动或被动免疫来封闭、失活变形链球菌菌体表面参与粘附和聚集的毒力因子，阻止变形链球菌在牙面粘附聚集、降低其致龋力，一直是龋病免疫预防研究的焦点。上世纪九十年代，DNA疫苗的发现被誉为疫苗学界的第三次革命。近年来，防龋DNA疫苗的研究成为龋病疫苗研究领域的热点。在前期的研究中我们已经成功的构建了载有SBR（Saliva-binding region，SBR）基因的双启动子表达载体pCN-SSIE（含真核启动子CMV和原核启动子Nir），且证实了它的免疫原性。本实验的目的是构建含有变形链球菌葡糖基转移酶葡聚糖结合区（Glucan-binding region，GBR）基因的表达载体pTriEx-4-GBR、纯化GBR融合蛋白、初步鉴定GBR融合蛋白的免疫原性并制备多克隆抗体，为二价双启动子防龋DNA疫苗（载有SBR和GBR基因）的构建和检测奠定基础。 方法：选择载体质粒pTriEx-4合适的酶切位点设计PCR引物，通过PCR从载有gtfB基因全长的质粒pSG52扩增GBR基因，利用定向克隆技术将GBR基因插入载体质粒的多克隆位点处，构建重组表达载体质粒pTriEx-4-GBR，筛选出阳性重组子进行DNA序列测定；将构建的表达质粒pTriEx-4-GBR转化大肠杆菌JM109（DE3）中并诱导表达GBR蛋白，应用HisTrapTM蛋白纯化试剂盒纯化出GBR融合蛋白，SDS-PAGE检测诱导表达和纯化浓缩的GBR蛋白；用纯化的