天麻素对人肝癌HepG-2细胞增殖凋亡的实验研究

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[目的]本实验研究天麻素对人肝癌HepG-2细胞的增殖、迁移侵袭、细胞凋亡、细胞周期的影响,并探究天麻素诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡和抑制细胞增殖的作用机制。[方法]用CCK-8法检测天麻素对人肝癌HepG-2细胞增殖的影响,并计算天麻素作用人肝癌HepG-2细胞的IC50值;用细胞克隆形成实验再次验证天麻素对人肝癌HepG-2细胞的增殖影响;细胞划痕实验验证天麻素对人肝癌HepG-2细胞迁移的影响;Transwell实验验证天麻素对人肝癌HepG-2细胞侵袭的影响;Annexin V-FITC+PI双染法标记凋亡细胞,利用荧光显微镜下观察拍照和流式细胞仪检测细胞凋亡;利用Western blot检测加入天麻素处理和未加天麻素处理人肝癌HepG-2细胞的凋亡蛋白和细胞周期蛋白的表达情况。[结果]1.CCK-8实验结果显示,与对照组(未加天麻素处理)相比,各实验组(加入天麻素处理)的0D值均有不同程度的降低,且随着加入天麻素浓度的升高,0D值越来越低;细胞克隆形成实验结果显示各实验组(加入天麻素处理)相较于对照组(未加天麻素处理)形成的细胞团均有减少,且可以看出随着天麻素浓度的升高,细胞增殖形成的细胞团越来越少;细胞划痕实验结果显示,实验组(加入天麻素处理)的划痕明显大于对照组(未加天麻素处理),加入天麻素的实验组的细胞迁移速率小于对照组;Transwell实验结果显示,对照组和实验组的人肝癌HepG-2细胞均可穿过基质胶,且随着天麻素浓度的不断升高,穿过基质胶的人肝癌HepG-2细胞也越来越多;原位免疫荧光实验和流式细胞术结果显示,实验组(加入天麻素处理)的凋亡细胞均多于对照组(未加天麻素处理),即实验组(加入天麻素处理)的凋亡率均高于对照组(未加天麻素处理),且凋亡率随着天麻素浓度的升高而升高。2.Western blot结果显示,经过天麻素处理的人肝癌HepG-2细胞的凋亡相关蛋白BAX、Caspase-3、Cleaved-caspase-3的表达水平均高于对照组,而BCL-2蛋白表达水平则低于对照组;经过天麻素处理的人肝癌HepG-2细胞的细胞周期相关蛋白Cyclin-D3的表达水平低于对照组。[结论]1.天麻素可抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖、侵袭和迁移,且随着天麻素浓度的升高,抑制作用增强,存在量效关系;天麻素可诱导人肝癌HepG-2细胞发生凋亡,且随着天麻素浓度的升高,凋亡的细胞越多,存在量效关系。2.天麻素通过促进促凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Cleaved-caspase-3的表达,抑制抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而促进细胞凋亡。3.天麻素可能通过抑制周期蛋白Cyclin-D3的表达,抑制人肝癌HepG-2细胞的G1/S期过渡,使人肝癌HepG-2细胞停滞在G1期,从而抑制人肝癌HepG-2细胞增殖。
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