用MAPs技术制备肿瘤相关基因1A6/DRIM蛋白N端多克隆抗体

来源 :北京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shade89
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
GES-1细胞系是我室经SV40T转化的胎儿胃粘膜上皮永生化细胞系,可在体外稳定传代,并且在裸鼠中不致瘤,MC细胞系是GES-1细胞经胃癌相关化学致癌剂亚硝酰胺代表物N甲基N硝基胍嘧啶(MNNG)处理获得.而Key-1A6是利用差异显示法比较GES-1和MC细胞得到的基因片段之一(GenBank:gi11464475,AF072718)[i],Key-1A6在GES-1细胞中高表达[2].利用NCBIBLAST发现Key-1A6基因与Schwirzke在不转移的乳腺癌细胞系中经差异显示克隆得到的DRIM(Down-Regulated In Metastasis)基因(gi 3242214,)[3]在C端约3000bp同源性为100%,具有相同的开放阅读框架,认为两者是同一个基因,命名为1A6/DRIM.1A6/DRIM基因定位于12q23.2-23.3,eDNA全长9017bp,有62个外显子,编码2785个氨基酸,预测蛋白质分子量为318.43KD,等电点为7.07.因为1A6/DRIM基因编码的蛋白分子量大,在生物信息学中预测到的功能较复杂,NCBI分析1A6/DRIM蛋白可能有两种形式存在,而且目前的研究发现1A6/DRIM是一个重要的肿瘤相关基因,所以针对这一新基因制备特异性强的抗体对于功能的研究非常重要.经ELISA检测示多克隆抗体(我们称之为HR-1)的效价为10-5,以HR-1来检测BGC-823细胞的核浆内容物中1A6/DRIM蛋白的表达情况,Western Blot显示在1:500时可以显示特异性的条带,分子量约为310kDa,与生物信息学预测结果一致,而且与1A6/DRIM基因的C端制备的单克隆抗体识别的蛋白质的位置相同,可以说明多克隆抗体HR-1与C端的单克隆抗体特异性相同,通过多肽合成的方法成功的获得了1A6/DRIM蛋白的N端抗体.以HR-1来检测1A6/DRIM基因在各种细胞内的表达情况,多次反复实验总结1A6/DRIM在胃癌、肝癌、乳腺癌细胞系中高表达,如在胃癌细胞系BGC-823、KATO-Ⅲ、肝癌细胞系HepG2、乳腺癌细胞系MCF-7和T47D、宫颈癌细胞系HeLa中表达,在血液肿瘤细胞系U266中不表达.通过免疫荧光的方法检测1A6/DRIM在细胞内的定位情况,结果显示1A6/DRIM主要定位在细胞核内.
其他文献
A multi dimensional concatenation scheme for block codes is introduced, in which information symbols are interleaved and re encoded for more than once. It pro
期刊
本章涉及的内容影响深远,希望同学们认真学习,仔细体会其中的思想,历年中考都有考题光顾本章. 现将今年各地中考题选取几题解析如下.  1. (2015·四川成都第7题)  数a、b在数轴上对应的点的位置如图所示,计算a-b的结果为( ).  A. a b B. a-b  C. b-a D. -a-b  【答案】C.  【解析】根据数轴上两数的特点判断出a、b的符号及绝对值的大小,再对a-b进行分析即
《苏科版数学七年级下册》有这样一道题:桌上有3只杯口都朝上的茶杯,每次翻转2只,能否经过若干次翻转使3只杯子的杯口全部朝下?7只杯口都朝上的茶杯每次翻转3只呢?如果用“ 1”或“-1”分别表示杯口“朝上”或“朝下”,你能用有理数的运算说明其中的道理吗?  下面我们通过操作探究来解决这一问题.  一、 动手操作 获得结论  探究一:取3只茶杯,杯口全部朝上,每次翻转其中1只,经过若干次翻转,能否使杯
活动目标:rn1. 通过操作测量,估算叠合后纸张的厚度,使合情推理过渡到演绎推理.rn2. 通过折纸活动,经历几何倍增的过程,培养估算能力,培养数感.
同学们刚进七年级就学习到有理数,扩充了数系,开拓了自己的知识视野.有理数中蕴含了丰富的数学思想方法,所谓的数学思想,是指人们对数学理论与内容的本质认识,它直接支配着数学的实践活动,所谓的数学方法,是指某一数学活动的途径、程序、手段,它具有过程性、层次性、可操作性等特点. 数学思想方法是以具体数学内容为载体,又高于具体数学内容的一种指导思想和普遍适用的方法.  一、 数形结合思想  我国著名数学家华
王米叶片长宽生长有显著相关,经三年观察、分析结果证明:建立回归方程(?)=a+bxr=0.9749;经数理统计,t>t0.001,极为显著相关。上述结果,在不同地区,不同播期,不同品种,不同处
绝对值,是苏科版七年级上册“有理数”这一章的一个重点. 课本中给绝对值下的定义为:数轴上表示一个数的点与原点的距离叫作这个数的绝对值. 如果同学们觉得文字性的表述有些抽象,那么我们不妨使这句话具体一些.  如图1,点A,B,C,D,E分别表示数轴上的有理数-5,-3.5,0,2.5,5. 通过图可以得到,点A到原点(0)的距离为5,即-5的绝对值为5,用符号语言表示为-5=5,以此类推,-3.5=
生活处处是数学. 生活中许多问题,都要用有理数来解决问题. 下面来看几个故事吧.  故事1 一个星期天的上午,小亮和爸爸妈妈在家里看电视,电视上正在播放一场篮球比赛. 看了一会儿,爸爸突然对小亮说:“小亮,我来考你一个数学问题,看看你会不会?” 小亮张口就说:“好的,没问题. ”爸爸想了一下,说道:“假设红队一分钟投进8个球,蓝队一分钟投进6个球,他们一起投了8分钟之后,蓝队提高命中率一分钟投进1
利用有理数的乘方解决实际问题,是“有理数”这一章节的重点内容之一. 在学习这一课的时候,我遇到了几道有趣的题目,现与大家分享.  问题一:手工拉面是我国的传统面食. 制作时,拉面师傅将一团和好的面,揉搓成1根长条后,手握两端用力拉长,然后将长条对折,再拉长,再对折(每次对折称为“一扣”),如此反复操作,连续拉扣若干次后便成了许多根细细的面条. 你能算出拉扣6次后共有多少根面条吗?  【思考与分析】
创业项目概况  主要经营范围:  各种炒饭、盖浇饭、家常小炒。  拟成立企业(机构)类型:  □生产制造 ■零售 □批发 ■服务 □农业 □新型产业 □传统产业 □其他  创业项目持有者的个人情况  以往与创业相关的人生经验(包括时间、地点、内容):  2011年3月入校后便参与班级创业教育和创业实践活动。  2011年4月参加烹饪系创业团队参加创业培训及创业实践活动。  2011年3月参与烹饪系