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抗生素耐受性已成为全球关注的问题，开发新型抗生素已成为当前研究的热点。抗菌肽（antimicrobial peptides，AMPs）是一类存在于大多数生物体内的两亲性、带正电的小分子多肽，具有广谱抗菌活性。与抗生素相比，抗菌肽不易产生耐药性。抗菌肽的这些特性使其极有希望发展为新型抗菌药物而取代抗生素，然而生产成本高是将AMPs推向临床面临的最大障碍。目前利用基因工程技术手段生产抗菌肽已得到广泛应用。本研究选择谷胱甘肽巯基转移酶（Glutathione S-transferase，GST）作为融合标签，尝试利用大肠杆菌表达系统制备9种自然界中常见的抗菌肽。利用生物信息学的方法从NCBI中筛选出9种抗菌肽基因，分别是GK10，LKW，Fowlicidin-3，Hclocidin18，KSLS，RM12，RM13，Magainin II和SPFK。根据抗菌肽的氨基酸序列及大肠杆菌密码子的偏爱性，设计合成9对具有反向互补序列的引物，并在其上游引物5’端引入羟胺切割蛋白位点（Asn-Gly）。PCR扩增获得9个抗菌肽基因片段，分别构建重组表达载体pGEX-4T-1-AMPs，转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导表达。超声裂解菌体，SDS-PAGE和Westernblotting检测，融合蛋白GST-AMPs成功表达，主要存在上清中，分子量都与理论值相符。融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化后，经羟胺剪切缓冲液切割融合蛋白，释放抗菌肽。以PBS缓冲液和未切割的融合蛋白作为对照，通过琼脂扩散法抑菌实验检测其对大肠杆菌和溶壁微球菌的抑菌活性。实验结果表明，与对照组相比，抗菌肽GK10、LKW、Fowlicidin-3、Hclocidin18、RM13、Magainin II对两种受试菌都具有明显的抑菌活性。微量稀释法检测抗菌肽的最小抑菌浓度，结果显示其对大肠杆菌和溶壁微球菌的抑菌活性相似，由强到弱顺序均为GK10、Fowlicidin-3、Hclocidin18、LKW、M2、RM13。本研究为大肠杆菌表达系统制备抗菌肽的可行性提供了参考，为筛选新型抗菌药物奠定了基础，有利于抗菌肽的产业化。