抗菌肽是一类带正电荷的两亲性小分子肽的总称，具有抗菌谱广、不易产生耐药性等优点。抗菌肽来源广泛，分类多样，且生物活性很强，在医药、畜牧业以及食品等领域应用广泛。　　杂合抗菌肽是基因工程技术产物之一，利用基因工程技术生产抗菌肽具有用时短、含量高等优点。杂合抗菌肽主要是由两种或多种抗菌肽的部分功能肽链拼接组成，具有广谱、低毒以及高效等优点。研究发现，改造的抗菌肽具有与蓝本相似甚至更强的生物活性，并且毒副作用降低，具有非常大的研究价值。　　本研究拟将哺乳动物抗菌肽（Hexapeptide）、两栖类抗菌肽（Magainin）、昆虫抗菌肽（CecropinA和Melittin）的有效作用部分拼接在一起，以获得一种新型的杂合抗菌肽HMCM。本研究根据目的抗菌肽HMCM的氨基酸序列和大肠杆菌B细胞的密码子偏好性设计了目的蛋白HMCM的基因序列，并对HMCM的生物信息学进行分析；设计了三条引物通过两轮PCR反应获得目的基因，将目的基因克隆到原核表达载体pET-32a-c(+)构建了重组表达载体pET-32a-HMCM；将重组质粒转化原核表达细胞E.coliBL21(DE3)实现融合表达，通过摸索诱导时间、IPTG浓度、OD600和温度等条件确定了融合蛋白表达的最佳条件，并确定了融合蛋白以可溶形式存在；通过亲和层析快速纯化了融合蛋白，并进行了Western-blotting鉴定；最后用EK酶酶切融合蛋白释放出HMCM，对HMCM的抗菌性进行了初步分析。　　本研究获得的主要成果如下：　　①生物信息学分析表明，HMCM具有抗菌肽的基本性质：分子量大小为4.07kD，等电点pI为12.805；N端亲水，C端疏水；二级结构主要为α螺旋结构，含有少量的β折叠结构、β转角以及无规则卷曲。　　②经两轮PCR反应获得了编码HMCM的基因片段，并克隆到经KpnI和EcoRI酶切的原核表达载体pET-32a-c(+)，获得了重组表达载体pET-32a-HMCM。　　③实现了融合蛋白在表达菌株E.coliBL21(DE3)中的试表达以及表达条件的优化。最终优化的表达条件为：诱导时间3h，诱导初始OD600=0.9左右，诱导IPTG浓度为0.8mmol/L，诱导温度为30℃。　　④超声波破碎实验表明，融合蛋白以可溶形式存在于菌体上清中。超滤浓缩上清液，亲和层析纯化后获得了单一的目的条带，并进行了Western-blotting鉴定。　　⑤蛋白浓度测定结果表明，融合蛋白的表达水平达到了毫克级，每升培养液可生产11.92mg融合蛋白。　　⑥用EK酶酶切融合蛋白，释放出HMCM，酶切效果良好。　　⑦以枯草芽孢杆菌和大肠杆菌DH5α为实验菌对HMCM的抗菌活性进行了初步鉴定。结果表明：酶切获得的HMCM和未酶切的融合蛋白对枯草芽孢杆菌的生长均具有抑制作用，并且HMCM活性强于融合蛋白，但两者对大肠杆菌DH5α的生长均无明显抑制作用。