非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)作为一种慢性肝损伤疾病,是指除酒精因素外其他因素导致肝脏中脂质过度堆积现象。NAFLD代表一系列复杂肝脏损伤情况,从单纯性肝脏脂肪堆积以及非酒精性脂肪肝炎(Nonalcoholic Steatohepatitis,NASH)到发展成为肝脏纤维化以及最终的肝癌都属于NAFLD的范畴。NAFLD是慢性肝功能损伤的最常见原因,也是世界范围内最常见的公共卫生问题之一。最近的流行病学研究表明NAFLD患者占总人口的12-38%,而NASH患病率在3-15%之间。在中国,随着代谢紊乱导致疾病发生的几率增加,如肥胖、2型糖尿病、血脂异常,NAFLD逐渐成为人们普遍关注的健康问题。在2型糖尿病患者中,NAFLD患病率为28-55%;而在高脂血症患者中为27%-92%。NAFLD被认为是代谢综合征的肝脏表现,与肥胖和胰岛素抵抗密切相关。PNPLA(Patatin-like Phospholipase domain-containing protein,PNPLA)家族含有一个马铃薯样磷脂酶结构域,包括9个成员(PNPLA1-9)。PNPLA家族蛋白中最为广泛研究的是 PNPLA2 即 ATGL(Adipose triglyceride lipase,ATGL)以及PNPLA3。PNPLA3是PNPLA家族蛋白中发现与NAFLD最显著相关的蛋白,它的第148位亮氨酸突变为异亮氨酸会导致严重的非酒精性脂肪肝。ATGL具有水解甘油三酯(Triglyceride,TAG)成为甘油二酯的功能,是调节TAG水解的限速酶。作为PNPLA家族成员,PNPLA7具有溶血磷脂酶活性,在体外可以水解溶血磷脂酸和溶血磷脂胆碱。蛋白的组织、亚细胞分布和功能密切相关,本论文主要对PNPLA7的亚细胞器分布及其功能相关性进行了初步研究。我们利用生物信息学软件对PNPLA7的亚细胞分布进行了预测,随后根据预测结果构建了不同的截短体质粒,并通过亚细胞器分离以及免疫荧光技术对PNPLA7的亚细胞器布定位进行研究。亚细胞器分离以及免疫荧光结果显示,PNPLA7是定位在内质网(Endoplasmic reticulum,ER)上的蛋白,aa35-60是PNPLA7在内质网上的跨膜区域。同时免疫荧光结果显示PNPLA7具有包裹线粒体的特点,此外通过亚细胞器分离结果发现PNPAL7也分布在线粒体相关膜(Mitochondrial associated membrane,MAM)上。综上所述,本研究发现PNPLA7蛋白是定位在内质网上的单次跨膜蛋白,内质网跨膜区域为PNPLA7(aa35-60)。此外研究发现PNPLA7也分布在线粒体相关膜上并且免疫荧光结果显示PNPLA7包裹线粒体的结构特征。本研究表明PNPLA7(aa35-60)不仅影响PNPLA7在内质网上的定位还会影响PNPLA7蛋白包裹线粒体的结构特征。内质网和线粒体都是细胞内重要的细胞器,而PNPLA7蛋白在内质网和线粒体上的分布提示该蛋白功能可能和两者间的代谢通路有相关性,为进一步探讨PNPLA7蛋白的功能提供了新的思路。