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目的：研究大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的体外分离培养；观察Brdu、 DAPI以及Hoechst33342体外染色的合适时间和最佳剂量,比较三种方法的优缺点,同时利用细胞标记技术探讨大鼠骨髓间充质干细胞移植对失神经骨折愈合中骨痂改变的影响。方法：骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)取自SD雄性大鼠(重量80g)的股骨和胫骨,然后采用贴壁分离培养法对BMSCs进行分离培养,当BMSCs培养至第三代时,采用流式细胞仪对其表面抗原(CD34, CD44, CD45)进行测定；同时分别用Brdu、 DAPI以及Hoechst33342对BMSCs进行染色标记,Brdu标记效果用免疫细胞化学方法检测,DAPI和Hoechst33342的标记率用荧光显微镜观测,最后用MTT检测BMSCs的细胞增值率,观察三种不同方法体外染色的合适时间和最佳剂量,同时比较其优缺点。上述实验完成后,选取3月龄雄性SD大鼠48只随机分为6组(n=8),A组为左胫骨骨折组,B组为T10脊髓横断+左胫骨骨折组,C组为T10脊髓横断+左胫骨骨折+自体骨髓间充质干细胞移植组,D组为左胫骨骨折+DMEM组,E组为T10脊髓横断+左胫骨骨折(?)DMEM组,F组为左胫骨骨折+自体骨髓间充质干细胞移植组。术前15天取大鼠MSCS,采用Brdu标记,C、F组模型建立2天后将标记好的细胞以局部注射的方法移植到骨折断端。术后对B、C、E组动物进行TARLOR评分；各组动物于术后1、2、3、4周拍摄左胫骨DR并检测、计算骨痂最大横截面。结果：流式细胞仪检测发现BMSCs表达CD44阳性,CD34和CD45阴性；BMSCs染色前后其表面标志物表达无明显统计学差异(p<0.05)；Brdu染色标记的BMSCs最佳浓度和时间是10μmol/L48hours; DAPI染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是20μg/ml、30min; Hoechst33342染色标记BMSCs的最佳浓度和时间是5μg/ml、1h。动物实验：术后B、C、E组TARLOR评分均达到实验要求；Brdu标记的BMSCs在移植后第3周仍然可见荧光标记。术后1、2、3、4周各胫骨骨痂宽度：术后第1、2、3周,B、C、E组骨痂宽度较其余组有统计学意义(P<0.05),术后第4周,C组骨痂宽度较B、E组下降,但B、C、E组较其他组仍有统计学意义(P<0.05)。结论：采用粘附贴壁分离培养法能够有效的获取高纯度的BMSCs;运用Brdu、 DAPI以及Hoechst33342三种方法标记BMSCs效果良好,方法可靠、合理,为研究BMSCs体内追踪打下了基础；大鼠脊髓横断合并胫骨干骨折后,骨折愈合速度加快,但骨痂的体积和其生物力学成负相关,是一种病理性骨痂；大鼠骨髓间充质干细胞移植(BMSCs)改变了成骨潜能,促进了病理性骨痂向正常骨痂的转变,对失神经骨折愈合有积极正向作用。