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第一部分利拉鲁肽对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究【目的】探讨利拉鲁肽（Liraglutide,Lirag）对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用以及机制【方法】构建小鼠致死性肾缺血再灌注损伤（IRI）模型,采用5种不同的Lirag给药方案进行处理。分别于术前60 h、48 h、24 h、12 h、1 h开始皮下注射Lirag,200μg/kg,q12h。行单侧肾缺血再灌注损伤术,术后10 h,再次皮下注射或不注射Lirag 200μg/kg。根据实验结果,筛选出保护作用最强的给药方案进行后续的机制研究。检测再灌注24 h后血清肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平,以及肾组织病理损伤和炎症细胞浸润情况。此外,通过Western blot、免疫组化和ELISA观察缺血和再灌注后不同时间点肾组织内和血浆中HMGB1的表达情况。用RT-PCR检测HMGB1下游信号通路及炎症因子的表达情况。体外实验,通过免疫荧光检测Lirag对低氧诱导的人肾小管上皮细胞系（HK-2）中HMGB1核浆迁移的抑制情况。通过重组HMGB1（r HMGB1）、GLP-1受体敲基因鼠（GLP-1R-/-）以及GLP-1受体拮抗剂Exendin（9-39）来进一步证实Lirag的保护作用与HMGB1和GLP-1受体的关系。【结果】通过检测术后24 h小鼠的SCr和BUN水平,我们发现,术前60 h开始,缺血前注射6剂、再灌注10 h注射1剂的给药方案,对肾IRI具有最好的保护效果。在该方案的处理下,肾组织的HE、MPO、F4/80和TUNEL染色显示,肾组织损伤、炎性细胞浸润和凋亡均明显减轻。Western blot、免疫组化和ELISA结果显示,在缺血和再灌注后1h、3h和24h,Lirag干预均显著抑制肾实质细胞HMGB1的核浆迁移及释放。RT-PCR结果显示,IRI诱导的HMGB1受体（TLR2、TLR4和RAGE）及炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1）的升高表达均被利拉鲁肽显著抑制。体外实验中,Lirag能显著减轻低氧诱导的HK-2细胞中的HMGB1的核浆迁移。在再灌注后立即腹腔注射r HMGB1显著削弱利拉鲁肽对肾IRI的保护效果。而使用GLP-1R-/-小鼠或增加使用GLP-1R拮抗剂Exendin（9-39）后发现,Lirag对肾IRI的保护效果也被部分逆转。体外实验中,Exendin（9-39）能大部分逆转Lirag对低氧诱导的HK-2细胞中HMGB1核浆迁移的抑制作用。【结论】Lirag能对小鼠致死性肾IRI发挥显著的保护作用,这与抑制肾实质细胞HMGB1的核浆迁移与释放有关,并且在机制上部分依赖肾组织GLP-1R表达。第二部分利拉鲁肽减轻UUO导致的纤维化作用与抑制HMGB1的核浆迁移与释放有关【目的】探讨利拉鲁肽（Liraglutide,Lirag）减轻肾脏纤维化是否与抑制肾实质细胞HMGB1释放有关【方法】构建单侧输尿管梗阻（UUO）模型,给小鼠皮下注射Lirag进行干预。实验分为四组:Normal组,Sham组,UUO组,UUO+Lirag组（300μg/kg,q12h）。术后7 d收集小鼠肾脏标本和外周血血清标本。对肾组织行HE染色和MASSON染色,以判断肾损伤以及纤维化程度。使用RT-PCR、Western blot以及免疫组化检测纤维化相关指标（α-SMA、TGF-β和Collagen I）的表达。TUNEL染色及免疫组化染色分别检测肾小管上皮细胞的凋亡及肾脏中炎症细胞（巨噬细胞以及中性粒细胞）的浸润情况。RT-PCR检测肾组织中炎症因子的产生。Western blot、免疫组化以及ELISA检测肾组织中HMGB1的核浆迁移情况以及向外周血的释放程度。通过Western blot检测HMGB1的主要受体TLR4的表达以及磷酸化的NF-κB的入核情况。通过补充外源性重组HMGB1（r HMGB1）进一步验证Lirag对肾纤维化的保护作用是否与抑制HMGB1的释放有关。【结果】HE染色显示:与Normal和Sham组相比,UUO组的肾组织损伤显著,MASSON染色提示肾组织较多的胶原沉积;检测肾组织纤维化相关指标（α-SMA、TGF-β和Collagen I）结果提示,肾组织发生了明显的纤维化。而Lirag治疗显著改善了肾脏组织的损伤,抑制了间质中的胶原沉积,降低了肾脏中纤维化相关指标的表达。免疫组化及RT-PCR提示:UUO组肾组织中炎症细胞浸润及炎症因子产生显著增多,使用Lirag干预后,炎性细胞浸润及炎症因子产生均明显降低。术后7 d,UUO组中出现了明显的HMGB1核浆迁移及向外周血的释放;而Lirag干预后,肾组织中HMGB1的核浆迁移以及释放到外周血的HMGB1水平明显降低。同时,Lirag的干预还显著抑制了HMGB1下游受体TLR4的升高以及磷酸化NF-κB的入核。而外源性补充r HMGB1后大部分逆转Lirag的上述各种保护效应。【结论】Lirag可以显著抑制UUO模型所诱导的肾损伤及纤维化,这种保护作用可能与抑制UUO术后肾小管上皮细胞HMGB1的核浆迁移与释放、降低肾组织TLR4的表达并抑制NF-κB信号通路的活化有关。